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免疫细胞化学Zamboni's液与PLP液

2020.9.27

  配制方法:称取多聚甲醛20 g,加入饱和苦味酸150 ml,加热至60 ℃左右,持续搅拌使充分溶解、过滤、冷却后,加Karasson-Schwlt's PB至1000 ml充分混合(Karasson–Schwlt's磷酸缓冲液的配制配制方法见后)。

    该固定液适于电镜免疫细胞化学,对超微结构的保存较纯甲醛为优,也适于光镜免疫细胞化学研究,为实验室常用固定剂之一。我们在应用中,常采用2.5%的多聚甲醛和30%的饱和苦味酸,以增加其对组织的穿透力和固定效果,保存更多的组织抗原。固定时间为6~18 h。

    PLP液  PLP液即过碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定液(Periodate-Lysine-paraform-alde-hyde fixative)

试剂:过碘酸钠、赖氨酸盐酸盐(或盐酸赖氨酸)、多聚甲醛、蒸馏水。

配制方法:

(1)贮存液A(0.1 mol/L赖氨酸-0.5mol/L Na3PO4,pH7.4):称取赖氨酸盐酸盐1.827 g溶于50 ml蒸馏水中,得0.2 mol/L的赖氨酸盐酸盐溶液,然后加入Na2HPO4至0.1 mol/L,将pH调至7.4,补足0.1 mol/L的PB至100 ml,使赖氨酸浓度也为0.1 mol/L,4 ℃冰箱保存,两周内使用。此溶液的渗透浓度为300 mOsmmol/L/kg。抗原

(2)贮存液B(8%多聚甲醛溶液):称8 g多聚甲醛加入100 ml蒸馏水中,配成8%多聚甲醛液(方法见前)。过滤后4 ℃冰箱保存。

(3)临用前,以3份A液与1份B液混合,再加入结晶过碘酸钠(NaIO4),使NaIO4终浓度为2%。由于AB两液混合,pH从约7.5降至6.2,故固定时不需再调pH值。固定时间为6~18 h。

    该固定剂较适于富含糖类的组织,对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。其机制是借助于过碘酸氧化组织中的糖类形成醛基,通过赖氨酸的双价氨基与醛基结合,从而与糖形成交联。由于组织抗原绝大多数都是由蛋白质和糖两部分构成,抗原决定簇位于蛋白部分,故该固定剂有选择性地使糖类固定,这样既稳定了抗原,又不影响其在组织中的位置关系。Mclean和Nakane等认为,zui佳的混合是:含0.01 mol/L的过碘酸盐、0.075 mol/L的赖氨酸、2%的多聚甲醛及0.037 mol/L的磷酸缓冲液。




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