液相色谱-质谱分析时基质效应的评定方法
通过评液相色谱-质谱定基质对分析物信号的影响程度,可大致将基质效应的评定归结为2种方法:柱后注射法和提取后添加法。
1 柱后注射法
柱后注射法属于动态方法,注射泵和接色谱柱的液相系统通过三通接头与质谱连接。注射泵恒流注射一定浓度的分析物;生物样品不添加分析物,提取后按已定的色谱条件进样,记录分析物的响应,此方法可考察整个色谱循环的基质影响。需要注意的是,注射分析物浓度应在所需要分析的浓度范围内,若浓度过高,可能影响离子化效率而使结果出现偏差。
柱后注射法可通过基质效应在一个色谱循环中的出现和消失,清楚地显示不同样品前处理的影响、分析柱的适用性和基质效应的作用机制。Taylor等以免疫抑制剂西罗莫司(50mg/L)柱后注射,选用3种不同的进样方式对西罗莫司选用离子对m/z931.6/864.6进行选择反应监测模式检测发现,流动相进样,整个色谱循环中信号无变化;乙腈沉淀蛋白的样品,大部分色谱过程被抑制;经SPE法处理的样品,在出峰较早的时间段内有较小的抑制,其后则信号强
而稳定,没有抑制。说明采用SPE法处理,基质效应不明显,优于乙腈沉淀蛋白方法。
2 提取后添加法
采用提取后添加法建立数学模型评定基质效应在LC-MS/MS中使用的zui多,而且,此法可同时考察提取回收率。按照Matuszewski等的建议,比较3个不同条件下的信号峰面积平均值,其中,Set1:纯的标准品溶液,Set2:不同来源的生物样品基质提取后添加,Set3:不同来源的样品基质提取前添加,则基质效应(ME)=Set2/Set1,提取回收率(RE)=Set3/Set2,方法过程效率(PE)=Set3/Set1。这种考察方法可更全面、客观地量化评价基质效应。选取不同来源的空白基质,采用低、高2个浓度点,各条件下重复测定5个样品。
