冰冻组织制备及切片实验
| 实验材料 | |
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| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1. 将一个50 ml 硬质玻璃烧杯浸入盛有液氮的烧瓶（或敞口聚苯乙烯盒）中冰冻，烧杯中加CryoKwik（或异戊烷）。
3. 保证CryoKwik 呈液状（必要的话，通过接触一热的金属棒使其熔化），将样品浸于冷的CryoKwik 中1 min。
4. 置带样品的滤纸条于冰冻切片仪的样品槽中，并固定在有一薄层OCT化合物的切片托盘上。
图一、切片程序
8. 用刀快切，在样品块上修整出“光面”（每秒切出一张切片’厚约5~10 μm）。待已切至组织样品，从切面上可看到所要切的组织结构或样品块大小理想时（一边在0.5~1 cm之间），便可收集切片，按步骤9进行切片的收集（滚板法）。
（2）扭动转轴并切片，在此情况下切片将到达刀的边缘处并停住。
（3）升起滚板，用一小毛刷，将切好的切片从切口处扫下来，降下滚板，并稍微向前推移。
（4）小重复步骤（1）~（3）直至切片平稳地滑过滚板与刀间（通常滚板在刀口前方约 0.5 mm，然后进行下一步）。
图二、塑料滚板
11. 切片承于载玻片上后，用密毛刷（1/4英寸即6.35 mm）清理刀上聚集的碎冰。
12. 用毛刷清理刀时，需相当用力，而且应顺着刀口，否则切片刀会很快变钝或拫坏毛刷。 展开 |
| 注意事项 | 1. 样品制成半流质状最适于在滤纸上冻结，用毛细吸管吸取200~300 μl 样品液滴加于滤纸上。多数组织样品将自然地粘附于滤纸上，如附着不上，则有必要在样品和滤纸间使用少量OCT化合物。 |
