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间接胶乳凝集试验

2019.4.23

实验概要

        以胶乳颗粒为载体,将抗原吸附在载体上制备成致敏载体颗粒,用以检测标本中未知抗体的方法,称之为间接胶乳凝集试验。         本实验以类风湿因子(Rheumatic factor   RF)测定为例。RF是一种发生于类风湿病人血清中的抗人变性IgG的自身抗体(血清中以IgM结构为主),此种自身抗体可与IgG的Fc段呈特异性凝集反应。将变性IgG致敏胶乳颗粒(羧化聚苯乙烯胶乳),使其吸附在胶乳颗粒载体上,当待检血清中含有RF时,致敏胶乳颗粒上变性IgG与相对应的抗体两者相遇,即可发生凝集现象。

主要试剂

1.类风湿免疫诊断试剂盒:人变性IgG致敏的胶乳颗粒,阳性血清,阴性血清。

2.标本:被检血清56℃30分种灭活,可阻止假阳性凝集。

3.生理盐水。

主要设备

        毛细管、刻度吸管、试管、牙签、黑色方格反应板、微量震荡器等

实验步骤

【操作方法】

1.先用生理盐水将被检血清、阳性血清、阴性血清做1:20稀释。

2.于黑色反应板上取三个方格,用毛细管分别加1:20被检血清、阳性、阴性血清各1滴。

3.于各方格内分别加胶乳试剂各一滴(每滴约0.05ml)。

4.立即旋转摇动玻板或用微量震荡器震荡,使两者充分混匀,3分钟内观察结果。

【结果观察】

1. 阳    性:    3分钟内出现明显而均匀的凝集颗粒、液体澄清者;

2. 阴    性:    3分钟内不凝集、仍保持均匀乳胶状者。

3. 定量测定:可将血清作倍比稀释,重复上法测定,以出现凝集的血清最高稀释度为RF的滴度。

【结果评价】

        此法操作简单,结果清晰可见,容易判断,敏感性高与血凝试验,但特异性稍差。

【临床意义】

        主要用于类风湿性关节炎的辅助诊断。此类病人RF阳性检出率达70%,但应注意,某些疾病如:全身性红斑狼疮、染性单核细胞增多症心内 膜炎、结核、梅毒、病毒感染、肾移植等,以及一些老年人可有类风湿因子水平增高的表现。 

注意事项

1.每次实验均应设阳性与阴性对照。

2.稀释待测血清:因为血清中IgG浓度过高可抑制反应的发生,血清中白蛋白及其它蛋白亦有妨碍反应的作用,所以试验前需适当稀释待测血清。

3.胶乳试剂应保存在4℃,不得冰冻;用前要充分摇匀;反应以室温为宜。

4.血清和试剂的液滴要大小一致。

5.观察时应排除特异性凝集的可能,要与阳性、阴性比较。


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