连续洗滤纯化均质胶乳颗粒：快速清除胶乳颗粒中.......
连续洗滤纯化均质胶乳颗粒：快速清除胶乳颗粒中过量游离蛋白
简介：
体外诊断试剂使用的微/纳米胶乳颗粒通常需要在蛋白（如抗体、抗原、核酸或其它大分子）包被反应之前或之后进行清洗，特别是在使用过量抗体进行被动吸附或共价偶联之后，多余的游离抗体必须清除，以保证可信的测试结果和最佳的灵敏度。本文简述了通过定量洗滤从乳胶颗粒中快速、有效去除游离蛋白的方法。
背景：
瞬时膜截留率定义为：
膜截留百分比 = r = 1-（Cf/Cr）
其中，Cf为透过膜的滤液中可溶性成分的浓度，Cr为从膜组件出口回流的溶液浓度。如果膜允许溶质自由通过，膜两侧的浓度相同，则截留百分比为0。如果膜完全截留一种溶质，则滤液中的浓度为0，膜截留百分比为1或100%。我们假设膜对胶乳颗粒的截留百分比为100%，而对游离蛋白的截留百分比接近0。所以，在恒定体积洗滤中，胶乳颗粒的浓度保持恒定，而游离蛋白渗透通过膜。游离蛋白的浓度可由以下公式计算：
浓度 = Co· e – v (1-r)
其中，v为洗滤的体积，r为溶质的截留百分比，Co为游离蛋白的起始浓度。如果蛋白的膜截留百分比为0，每体积洗滤后有63.2%通过进入滤液。
工艺条件：
起始处理为200ml 的50mM tris 缓冲液，其中20ml（10%）直径 0.255μm 的聚苯乙烯胶乳颗粒（Seradyn lot 1057），吸附2.5%牛血清白蛋白（BSA）。使用 KrosFlo® 系统，配用单根孔径0.1μm的MiniKros® Sampler组件，膜表面积为945cm2。颗粒溶液恒定速度循环，滤液端口在整个运行过程中都打开。起始进样压力为10 psig，并保持恒定。50mM tris 缓冲溶液以与滤液移除相同的速率加入到工艺容器，这样，即可维持恒定的200 ml 处理体积。14min内收集滤液体积2,500 ml （样品体积的12.5倍）。
KrosFlo Research 2i [KR2i] 切向流过滤系统
结果：
滤液中白蛋白的浓度使用BCA法测定。结果显示，与乳胶颗粒膜截留百分比为1而蛋白膜截留百分比为0的理想情况只有轻微偏差。游离BSA被快速清除，超过99.99%。在滤液中没有检测到乳胶颗粒，且吸附BSA的损失远没有达到可检测量。过滤效率保持相对恒定。
讨论：
使用MiniKros®和更大的 KrosFlo® 过滤组件进行恒定体积洗滤，是繁琐的离心/悬浮操作快速、高效的替换方法。同时，也可有效地在共价偶联反应之前去除表面活性剂和水溶性单体，显著节约时间和劳动力成本。瑞普利金中空纤维组件与需重复清洗的过滤设备相比，具有诸多优势。组件无表面活性剂，即取即用，蛋白截留不受清洗和多次重复使用的影响。
