用于检测和定量分析极性细胞代谢物的一种新颖...（二）
质谱分析
Synapt HDMS和Synapt G2 HDMS
该质谱仪在正离子MSE模式下运行。所用的毛细管电压为3.0kV，源温度和去溶剂化温度分别被设定为120℃和400℃。
在MSE采集模式下，仪器交替在低、高碰撞能量状态下进行交替扫描。这样可在一次分析内同时收集所有分析物的母离子和碎片离子的信息，消除了诸如DDA等其它常规方法所带来的采样偏差；在常规方法中，特定的m/z必须在碎片化前被分离出来。
Xevo-TQ质谱
Xevo TQ可同时在正离子和负离子模式下运行。毛细管电压为3.0kV，源温度和去溶剂化温度分别被设定为150℃和650℃。去溶剂化气体流速被设定为1200L／小时，碰撞气体（氩）的流速为0.18mL／分钟（4×10-3毫巴）。MS1/MS2分辨率被设置为单位质量（0.75Da FWHM）。
组织提取物的样品制备
红色的比目鱼肌（S）用来与白色的腓肠肌（G）进行比较，肌肉从禁食一整夜的BALB/c小鼠中切下并进行了急速冷冻。代谢物通过组织均质化的方法在1:1的甲醇：水混合溶剂中进行萃取，脂质通过将氯仿以1:1的比例添加至甲醇／水萃取液中而得到去除。去脂质后的组织萃取样本分别用400µL和4000µL的90:10乙腈：水混合溶剂进行挥干复溶。由于某些组分的含量高于定量上限，因此也对每份样本再稀释10倍进行了分析。
结果和讨论
1. 通过联用Synapt HDMS的UPLC进行HILIC LC-MS方法开发
图1. 108种标准强极性细胞代谢物的总离子色谱图，其中包括氨基酸、DNA/RNA碱基及其磷酸盐、辅酶A、B族维生素、有机酸等。
图1给出了108种标准强极性细胞代谢物的总离子色谱图（TIC），其中包括氨基酸、DNA/RNA碱基及其磷酸盐、辅酶A、B族维生素、有机酸等。此项试验通过联用沃特世Synapt HDMS（正离子MSE模式下）的沃特世UPLC【液相色谱条件（1）】而进行。
图2. 单一化合物提取离子色谱图示例（50mDa窗口内）
图2给出了关于单一化合物提取离子色谱图片段（50mDa窗口）的一些例子。所选取的提取离子色谱图中的大部分峰宽测定值介于5-15秒之间。然而，也观察到了拖尾峰，其峰宽长达60秒。因此，我们考虑修改液相色谱的条件。
-
焦点事件
