感受态细胞的特点和实验步骤
感觉态细胞的特点：
1.限制缺陷型：外切酶和内切酶活性缺失，外源基因进入后可稳定存在。
2.感染缺陷型：防止重组细胞扩散污染。
3.重组整合缺陷型：外源基因进入后游离在染色体外，不会发生重组。
4.高转化率：易接受外源核酸。
5.遗传互补：与载体有选择标记互补的表型，能够筛选。
感觉态细胞的实验步骤：
（1）感受态细胞的制备
1）挑取大肠杆菌划线于LB平板上，在37℃恒温培养过夜(16-18h)。
2）挑取单菌落于50mLLB培养基中37℃、200r/min培养3-4h，至出现薄雾状菌悬液即可。
3）将培养液置于冰上预冷15min，并间断轻轻摇动。
4）将冷却的培养液倒入己在冰上预冷的50mL离心管中。
5）在冷冻离心机中离心，4℃3000r/min离心5min。
6）弃上清、加入15mL冰上预冷的0.1mol/LCaCl2溶液,轻轻旋转，使细胞充分重新悬浮，冰上放置20-30min。
7）于4℃3000r/min离心5min。
8）弃上清，加入2mL冰上预冷的0.1mol/LCaCl2溶液，轻轻旋转，使细胞充分重新悬浮，5min后就可以用于转化实验，或添加保护剂，低温或超低温冷冻贮藏备用。
（2）感觉态细胞的DNA转化
1）将-80℃保存的细胞置于冰中融化10分钟。
2）取细胞移至新的转化管中。向细胞中加入0.1ng～10ng（3µl～10µl）的转化用DNA，轻轻混匀后冰中放置30分钟。
3）42℃水浴中放置45秒钟后，立即于冰中放置1～2分钟。
4）加入890µl37℃预温的SOC培养基，在37℃200r/min振荡培养50-60min,使细菌复苏，抗性得以表达。
5）取100μL左右转化液涂布在含有4μLIPTG，40μLx-ga1和氨苄青霉素(Amp50μg/mL)的平板上。
6）倒置平板于37℃培养16-18h，观察实验结果并记录。
