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溶液中大分子稳定性测量

2019.9.17

采用标准     

测量类型:温度中点Tm测量类型:焓∆H测量类型:热容变化∆Cp样品量:700µL样品池容积:500µLSample capacity:2 -5 个样品/ 8小时(手动系统)Cell material:钽样品池:硬币形Noise:0.25µCal/°CTypical sample concentration:0.1 - 2.0mg/mL温度范围:-10°C ~ 130°CMaximum scan rate:90°C/h 或 120°C/hResponse time:7s(高反馈)Multiple feedback modes:是(被动、高增益、低增益)Automated upgrade available:否Baseline repeatability:1.25µCal/°C电源功率:11-240V, 50/60Hz, 70W重量:8.2kg尺寸 (宽, 长, 高)::200mm x 440mm x 190mm 运行环境 Temperature (operating):10°C 到 28°C湿度::0% ~70% 相对湿度,无冷凝         

方法/原理/步骤     

MicroCal VP-DSC用于研究生物分子的分子内稳定性。它提供快速准确的跃迁点(Tm)测定并生成热力学信息,以便让我们能够深入了解影响构象和稳定性的因素。

溶液中的生物分子在其自然(折叠)构象和变性(去折叠)构象之间保持平衡。测得的热跃迁中点(Tm)可提供快速、简易的稳定性指示。Tm值越大,生物分子越稳定。

测量原理

121212.png

由蛋白质和其他大分子形成的清晰结构经历温度诱导的构象变化,如去折叠。这些变化造成非共价键重新分配,从而导致热吸收。差示扫描量热仪测量这种热量的吸收。

Prod-VP-DSC_1

MicroCal VP-Capillary DSC的热核心包括参比池和样品池,均封装在一个绝缘夹套中。该装置设计成始终保持两池处于相同温度。测量过程中,参比池和样品池同时以恒定的扫描速率加热。样品分子去折叠时,吸收热量,样品池和参比池间形成温差(ΔT)。这就导致整个帕帖尔单元内部形成热梯度,对两池进行冷却和加热,从而形成电压。电压被转化为电功率,控制帕帖尔单元将ΔT(温差)恢复为0。

例如,由于蛋白质去折叠是一个吸热事件,在信号中观察是一个正位移(热容)。该“溶解”跃迁的中点为Tm,曲线下的面积就是该过程的焓(ΔH)。            

仪器设备     

差示扫描量热法(DSC)是一种用来表征蛋白质和其他分子稳定性的强大分析工具。MicroCal VP-DSC提供快速、准确的跃迁点(Tm)确定功能,可生成样品的热力学信息,让我们能够深入了解影响构象和稳定性的因素。

MicroCal VP-DSC支持无标签研究自然状态的分子,可用于彩色溶液或浑浊的悬浮液。它可测量极其严格的结合常数,最高可达1020M-1。上样后无需操作节省了操作人员的时间,并且整个系统不需要其它配件、试剂或耗材。

典型应用包括测定蛋白质稳定性和去折叠热力学特性、抗体域结构测定、膜和脂质鉴定和超紧密分子相互作用的测量。

非反应性钽池提供出色的耐化学性。

池固定在原位,给出可再生和超灵敏的性能,并只需低程度维护。

有三个用户可选的响应时间,实现最佳性能。

用户可选的温度扫描速率和范围,应用多样性。

自持式增压系统(0.46 psi),适于研究温度高于沸点的溶液。

可提供用于测定微分比容的压力扰动量热附件。

帕帖尔元件保证精确的温度。

包括MicroCal Thermovac™样品制备和清洗装置。

通过VPViewer™软件控制,通过Origin®进行数据分析。

Tm飘移配体结合筛选。


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