食品中六六六和滴滴涕检测方法的优化
摘 要：采用有机试剂提取、浓缩、净化，把食品中残留的六六六、滴滴涕分离出来，用气相色谱电子捕获检测器分析检测。该方法峰形良好，检测时间短，其科学性、准确性、高效性都完全优于常规的4种国家标准检测方法。六六六的回收率为98%～101%，RSD为0.26%；滴滴涕的回收率为98%～102%，RSD为0.32%，因此，在食品中六六六、滴滴涕的检测中具有重要的实际指导意义。
关键词：六六六；滴滴涕；科学性；准确性；高效性；指导意义
六六六的成分是六氯环己烷，对昆虫有触杀、熏杀和胃毒作用，过去主要用于防治蝗虫、稻螟虫、小麦吸浆虫、蚊、蝇、臭虫等。六六六是属于神经及实质脏器一般毒性作用的毒物，大剂量可造成中枢神经及某些实质脏器的损伤，特别是对肝脏与肾脏的严重损害。滴滴涕又名双对氯苯基三氯乙烷，也是一种神经性毒剂，几乎对所有的昆虫都有很强的效用，并且对疟疾、痢疾等疾病有良好的作用，同时还能够让农作物增产。六六六、滴滴涕均属于有机氯农药，化学稳定性好、难降解、脂溶性大、易在脂肪组织中积累造成慢性中毒，从而对自然环境造成了污染，对动物和人类造成了危害。上个世纪60年代以来，六六六、滴滴涕被很多国家从人体、牛奶、禽蛋等上发现都有高残留，引起了全世界的重视。由于六六六、滴滴涕均属于神经及实质脏器毒物，并且可致癌，我国在上个世纪80年代初就已经禁止使用，因为由于我国30多年来长期使用这两种农药，不仅农、林、畜产品受到严重的残留污染，而且土壤、水等环境中都有较高的残留，很容易通过环境迁移到植物当中，进入食物链进行富集，从而影响人类健康，所以六六六、滴滴涕仍是我国食品中有机氯农药残留的主要检测项目。目前食品中六六六、滴滴涕残留量的检测方法有气相色谱法[1-11]、气质联用法[12-16]等，但是普遍存在前处理繁琐，基质效应影响大，杂质干扰等问题。目前经常使用的是气相色谱电子捕获检测器检测法。气相色谱-质谱联用法基质干扰小，检测灵敏度高，检出限低，但是价格比较贵，限制了其应用。GB/T 5009.146-2008《植物性食品中有机氯和拟除虫菊酯类农药多种残留量的测定》、GB/T 5009.19-2008《食品中有机氯农药多组分残留量的测定》、NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定》、GB/T 5009.162-2008《动物性食品中有机氯农药和拟除虫菊酯农药多组分残留量的测定》是检测有机氯农药常用的4种国家标准[17-20]，按照以上标准试验发现普遍存在峰形不好，检测时间较长，分离效果差等问题，根据反复试验不断优化检测条件，摸索出了检测峰形良好，检测时间短的方法，尤其是将检测时间优化为10min，极大的提高了检验检测的准确度和效率，对于日常食品中六六六、滴滴涕的检测具有现实指导意义。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
六六六（标准品，100μg/mL）、滴滴涕（标准品，100μg/mL）：国家环境监测研究院；30℃～60℃石油醚（色谱纯，99.5%）、丙酮（色谱纯，99.5%）、氯化钠（分析纯，99.5%）：天津市科密欧化学试剂有限公司；己烷（色谱纯，99.5%）、乙酸乙酯（色谱纯，99.5%）、环己烷（色谱纯，99.5%）：德国默克化学试剂有限公司。
1.2 仪器与设备
岛津GC-2014C气相色谱（电子捕获检测器ECD）：日本岛津公司；XB220A型电子天平：深圳市朗普电子科技有限公司；KH5200DB型超声波清洗器：上海乔枫实业有限公司；Advanced-Ⅱ-12高纯水机：成都唐氏康宁科技发展有限公司。
1.3 方法
1.3.1 色谱条件和参数
色谱柱：ZKAF-RPAI（30 m×0.32 mm×0.25 μm 毛细管柱）；进样口温度：290℃，检测器温度：295℃，柱温：245℃（恒温）；分流比：10∶1；载气：氮气，纯度≥99.999%，流速为30mL/min。
1.3.2 标准曲线绘制
分别储存在-5℃以下冰箱中浓度为100μg/mL的六六六、滴滴涕标准溶液，用正己烷逐级稀释到浓度为 0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μg/mL 的标准工作液，经0.2μm滤膜（Noly）过滤后由浓度低到高分别取1 μL注入色谱仪进行检测，测定峰面积，以峰面积对浓度（μg/mL）作标准曲线。
1.3.3 样品处理及测定
称取1 g～10 g样品（精确至 0.01 g），加入 2.5mL水，加入20mL丙酮，振荡30min，加入3 g氯化钠，再加入15mL石油醚（沸程30℃～60℃），再振荡30min。静置分层后，转有机相于玻璃器皿中，用水浴蒸近干，加入10mL乙酸乙酯-环己烷（1+1），浓缩，重复3次，最后定容至5mL。将5mL试样注入凝胶渗透色谱柱（GPC），用乙酸乙酯-环己烷（1+1）洗脱，将收集的流分浓缩约1mL，用氮气吹近干，用正己烷定容至1mL，用0.2 μm有机滤膜过滤，上气相色谱仪分析，根据保留时间定性，外标峰面积定量。
2 结果与分析
六六六的熔点159℃～160℃，沸点288℃；滴滴涕的熔点：108℃～109℃，沸点：260℃，为了保证六六六、滴滴涕能够迅速的被气化，并且不分解，以进样口的温度要稍微高于288℃，但是不能太高，经过试验290℃就能完全满足试验要求，检测器的温度一般和进样口温度等同，经过试验295℃最佳。柱温一般比进样口温度低30℃～70℃，也就是柱温在220℃～260℃，经过多次试验，柱温为245℃时效果最佳。为了防止溶剂峰对目标物质峰的影响，进行分流，在多次试验分流效果后确定分流比为10∶1为最佳。图1、图2、图3、图4、图5分别是优化的方法、GB/T 5009.19-2008《食品中有机氯农药多组分残留量的测定》、GB/T 5009.162-2008《动物性食品中有机氯农药和拟除虫菊酯农药多组分残留量的测定》、NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定》、GB/T 5009.146-2008《植物性食品中有机氯和拟除虫菊酯类农药多种残留量的测定》5种检测方法的色谱图。
从5种方法的色谱图可以清晰的看出本试验方法能够完全将4种六六六和4种滴滴涕分离开来，并且峰形良好，可以准确的定性、定量，分析时间仅为10min。方法GB/T 5009.19-2008也可以将六六六、滴滴涕分离开来，但是峰形较小，分析时间很长需要55min。方法GB/T 5009.162-2008方法和GB/T 5009.19-2008基本接近，也可以将六六六、滴滴涕分离开来，但也是峰形较小，分析时间很长需要60min。NY/T 761-2008不能完全将六六六、滴滴涕分离，不能够准确的定性和定量，分析时间较长为30min；方法GB/T 5009.146-2008也不能将六六六、滴滴涕分离，不能够准确的定性和定量，分析时间较长为30min。表1是对5种方法的综合性统计。
图1 优化方法谱图
Fig.1 Optimization method spectrogram
图2 GB/T 5009.19-2008方法谱图
Fig.2 GB/T 5009.19-2008 method spectrogram
图3 GB/T 5009.162-2008方法谱图
Fig.3 GB/T 5009.19-2008 method spectrogram
图4 NY/T 761-2008方法谱图
Fig.4 NY/T 761-2008 method spectrum
图5 GB/T 5009.146-2008方法谱图
Fig.5 GB/T 5009.146-2008 method spectrum
表1 5种检测方法统计表
Table 1 Statistical table of five detection methods
从图谱及统计表可以看出本方法采用ZKAF-RPAI毛细管柱，进样口温度290℃，检测器温度295℃，柱温245℃（恒温），分流比10∶1，检测效果完全优于其它4种国家标准。通过加标试验和重复性试验可得六六六的回收率为98%～101%，RSD为0.26%；滴滴涕的回收率为98%～102%，RSD为0.32%。
3 结论
本文建立了一种科学、高效、便捷的利用气相色谱法检测食品中六六六、滴滴涕的方法，不论是检测的科学性、准确性、高效性上都优于常规国家标准的方法，还是样品的提取和检测过程都比国家标准简便，检测方法易于掌握，具有很强的实用性，对于食品检测方法的更新具有很好推进作用。
参考文献：
[1]沈美芳,李卿,杭苏琴,等.水产品中六六六及滴滴涕残留检测前处理方法的比较研究[J].食品科学,2006(7):191-195
[2]阎正,张亚莉,冯天铸,等.毛细管气相色谱法测定5种中草药中有机氯农药的残留量[J].分析化学研究简报,2003,31(1):95-98
[3]王兴进.气相色谱法测定茶青中有机氯农药残留量[J].茶叶科学技术,2006(2):39-40
[4]郑艳明,郭新东,杜志峰,等.气相色谱法测定蛋和蛋制品中的六六六、滴滴涕[J].现代食品科技,2008(4):384-386
[5]黄盈煜,谢维平,傅晖蓉,等.茶叶中六种农药残留的气相色谱分析法[J].中华预防医学杂志,2005,39(6):416-418
[6]蒋开年,宋学伟,崔志斌,等.气相色谱法测定黄芪甘草中有机氯农药残留量[J].西南民族大学学报(自然科学版),2008,34(1):120-123
[7]凌云,刘绿叶,王李宝,等.条斑紫菜中滴滴涕残留量的测定[J].现代渔业信息,2010(1):15-16
[8]潘娟,华贤辉,商军,等.毛细管气相色谱法测定动物性食品中六六六和滴滴涕的残留量[J].中国兽药杂志,2009(3):46-49
[9]程雪梅.毛细管气相色谱法测定食品中六六六、滴滴涕农药残留[J].热带农业工程,2003(1):23-24
[10]李林,武术兰.出口生姜六六六和滴滴涕残留量检测技术研究[J].现代农业科技,2010(15):195-196
[11]黄玉娟,吴春发,罗飞,等.气相色谱法检测地下水中六六六和滴滴涕[J].环境监测管理与技术,2011(3):81-84
[12]任朝兴.固相萃取-气质联用法同时测定海水中六六六、滴滴涕、狄氏剂[J].分析仪器,2009(5):59-61
[13]赵琼晖,靳宝辉,谢丽琪,等.气相色谱-质谱法测定茶叶中的25种有机氯农药残留[J].色谱,2006,24(6):629-632
[14]任朝兴,温瑜荻,周文东,等.固相萃取-GC/MS法测定水样中20种有机氯农药[J].分析测试技术与仪器,2011(4):229-234
[15]张洪,雷昊,庞小刚,等.气相色谱-离子阱质谱联用测定葱中有机氯农药的含量[J].质谱学报,2011,32(3):185-186
[16]董玮玮,郝玉江,王丁,等.固相萃取-气相色谱-质谱法测定水中23种多氯联苯和10种有机氯农药残留[J].湖北农业科学,2011(8):1693-1696
[17]中华人民共和国卫生部,中国国家标准化管理委员.GB/T 5009.162-2008动物性食品中有机氯农药和拟除虫菊酯农药多组分残留量的测定[S].北京:中国标准出版社,2009
[18]中华人民共和国卫生部,中国国家标准化管理委员.GB/T 5009.146-2008植物性食品中有机氯和拟除虫菊酯类农药多种残留量的测定[S].北京:中国标准出版社,2009
[19]中华人民共和国卫生部,中国国家标准化管理委员.GB/T 5009.19-2008食品中有机氯农药多组分残留量的测定[S].北京:中国标准出版社,2009
[20]中华人民共和国农业部.NY/T 761-2008蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定[S].北京:农业出版社,2008
