禁用偶氮染料含量的检测（一）
偶氮染料(azo dyes，偶氮基两端连接芳基的一类有机化合物)是印染工艺中广泛应用的一类合成染料，用于多种天然和合成纤维的染色和印花，也用于油漆、塑料、橡胶等的着色。当纺织品、服装和皮革制品与人体直接接触后，某些偶氮染料与汗液等人体代谢物反应，生成可以致癌的芳香胺化合物并被人体吸收，对人体危害极大。偶氮染料被广泛应用，目前使用的偶氮染料达 3000 多种，其中大部分的偶氮染料都是安全的，只有可释放出指定的 24种芳香胺类的小部分偶氮染料（大约 200 多种）被禁止使用。
1992 年德国颁布法令开始立法禁止使用某些偶氮染料用于长期与皮肤接触的消费品。1994 - 1996年德国多次颁布修正案，制定了明确的禁止可还原致癌芳香胺的偶氮染料及用其加工的商品及时间表。1999 年，欧洲委员会为了保护公民的身体健康，也为了统一欧盟各国关于限制某些偶氮类染料使用的法规，提出了《关于禁止使用偶氮类染料指令》的立法建议。2002 年，欧盟理事会通过了该指令的“共识文件”，并于当年 9 月 11 日，正式通过了 2002/61/EC－“对欧盟委员会关于限制某些危险物质和制剂（偶氮染料）的销售和使用的76／769／EEC 指令”。该指令主要禁止纺织品、服装和皮革制品生产使用禁用偶氮染料，禁止使用含有偶氮染料且直接接触人体的纺织品、服装和皮革制品在欧盟市场销售，禁止这类商品从第三国进口。
欧盟官方针对不同的材料分别指定了三种偶氮染料测试方法：a) 皮革产品：CEN ISO/TS 17234：2003 皮革-化学测试-检验染色皮革是否含有某类偶氮染料；b) 纺织品产品：EN 14362-1：2003 纺织品─检验偶氮染料释出的芳族胺─第一部分：在毋须提取的情况下测试产品是否含有某类偶氮染料；c) 聚酯纤维产品：EN 14362-2：2003 纺织品─检验由偶氮染料释出的芳族胺─第二部分：提取纤维以测试产品是否含有某类偶氮染料。
中国在这方面同样做出了很多努力，2003 版的国家纺织产品基本安全技术规范 GB 18401 要求禁用可分解致癌芳香染料含量。最新版的 GB 18401-2010 要求其检出值不得高于20 mg/kg。
RephiLe 根据中华人民共和国国家标准 GB17592-2011，特别推荐下面的禁用偶氮染料含量检测解决方案。该方案采用 HPLC 检测，详细解决方案如下：
一、实验原理
样品在柠檬酸盐缓冲液中用连二亚硫酸钠还原生成芳香胺，提取分离后使用HPLC进行定量检测。
二、仪器和试剂
高效液相色谱仪，配有DAD
Direct-Pure UP 超纯水仪
乙醚，甲醇，柠檬酸缓冲液（RO 纯水配制，0.06 mol/L， pH=6.0），连二亚硫酸钠水溶液（RO 纯水配制，200 mg/mL），标准溶液*，硅藻土）
*标准溶液配制方法：用甲醇将下述内标化合物配置成 10 μg/mL 的混合内标溶液。
萘-d8（CAS No.：1146-65-2）
2，4，5-三氯苯胺（CAS No.：636-30-6）
蒽-d10（CAS No.：1719-06-8）
用混合内标溶液将附录 A 所列的芳香胺标准物质分别配成 10 μg/mL 的混合标准溶液。
三、试验方法
1、试样制备
将试样剪成 5 X 5 mm 的小片，混匀。称取 1.0 g 混合样，精确至 0.01 g，置于反应器中，加入 17 mL 预热到 70±2℃ 的柠檬酸缓冲液。将反应器密闭，用力震荡，置于 70±2℃的水浴中 30 min，充分润湿所有试样。打开反应器，加入 3.0 mL 连二亚硫酸钠水溶液，立即密闭震荡，在置于 70±2℃的水浴中 30 min，取出后 2 min 内冷却到室温。
2、萃取和浓缩
用玻璃棒挤压反应器中试样，将反应液全部倒入硅藻土提取柱内，吸附 15 min，用 4 x 20 mL 乙醚分四次洗提反应器中的试样，每次需混合乙醚和试样，然后将乙醚洗液倒入硅藻土提取柱中，控制流速，收集乙醚提取液于圆底烧瓶中。将上述的盛有乙醚提取液的圆底烧瓶置于真空旋转蒸发器上，于 35℃左右的温度低真空下浓缩至近 1 mL，再用缓氮气流驱除乙醚溶液，使其浓缩至近干。
3、检测
3.1 HPLC分析条件
a) 色谱柱：ODS C18（250 mm x 4.6 mm x 5 μm）
b) 流量：0.8 mL/min - 1.0 mL/min
c) 柱温：40℃
d) 进样量：10 μL
e) 检测器：DAD
f) 检测波长：240 nm；280n m；305 nm
g) 流动相 A：甲醇
h) 流动相 B：磷酸缓冲液（0.575 g NH4H2PO4 + 0.7 g NaH2PO4 ，溶于 1000 mL 超纯水（Direct-Pure UP 生产），pH=6.9）
i) 梯度：先用 15% 流动相 A 和 85% 流动相 B，45 min 线性转为 20% 流动相 A 和80% 流动相 B，保持 5 min
3.2 准确移取 1.0 mL 甲醇加入浓缩至近干的圆底烧瓶中，混匀，静置。然后分别取 1 μL混合标准工作溶液（10 μg/mL，现配现用）与试样溶液注入色谱仪，按上述条件操作。
HPLC 色谱图见附录 C2。
4、分析结果的计算
采用外标法计算：
Xi= (Ai×ci×V)/(Ais×m)
式中：
Xi——试样中分解出芳香胺i的含量，单位为 mg/kg；
Ai——样液中芳香胺i的峰面积（或峰高）；
ci——标准工作溶液中芳香胺i的浓度，单位为 mg/L；
V——样液最终体积，单位为 mL；
Ais——标准工作溶液中芳香胺i的峰面积（或峰高）；
m——试样量，单位为 g；
试验结果以各种芳香胺的检测结果分别表示，计算结果表示到个位数。低于测定低限（5 mg/kg）时，试验结果为未检出。
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