免疫酶标方法(直接法、间接法、PAP法和双PAP法)
一、直接法
1．标本固定。
2．PBS洗涤2×3分钟。
3．1% H2O2（或1% H2O2 甲醇）抑制内源性过氧化物，室温10～20分钟。
4．正常血清（1:10）孵育，室温20分钟。
5．滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜。
6．PBS洗涤3×3分钟。
7．DAB＋H2O2显色5～10分钟，镜下控制染色结果。DAB＋H2O2应用提前15分钟配制。
8．充分水洗后，复染、脱水、透明、封片、镜检。
二、间接法
1．标本固定。
2．PBS洗涤2×3分钟。
3．1% H2O2（或1% H2O2 甲醇）抑制内源性过氧化物，室温10～20分钟。
4．正常血清（1:10）孵育，室温20分钟。
5．滴加第一抗体，37℃1小时或4℃过夜。
6．PBS洗涤3×3分钟。
7．滴加酶标二抗，室温1小时。
8．PBS洗涤3×3分钟。
9．0.04%DAB＋0.03 %H2O2显色5～10分钟。
10． 充分水洗后，复染、脱水、透明、封片、镜检。
三、PAP法（过氧化物酶抗过氧化物酶抗体复合物法）
1．标定固定后，PBS洗涤。
2．1% H2O2（或1% H2O2甲醇）阻断内源性过氧化物，室温10～20分钟。
3．PBS洗涤2×3分钟。
4．正常血清（二抗的正常血清）孵育，室温20分钟。
5．滴加一抗，室温1小时或4℃过夜。
6．PBS洗涤3×3分钟。
7．滴加二抗，室温30分钟。
8．PBS洗涤3×3分钟。
9．加PAP复合物，室温60分钟。
10．PBS洗涤3×3分钟。
11．0.04%DAB＋0.03 %H2O2显色5～10分钟。
12．充分水洗。
13．苏木精复染，封片观察。
四、双PAP法
1-10．同单PAP法。
11．二次加酶标二抗。
12．PBS洗。
13．二次加PAP。
14．PBS洗。
15．0.04%DAB＋0.03 %H2O2显色5～10分钟。
16．苏木精复染核，封片，镜检。
