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免疫酶标技术——直接法

2019.4.07
实验方法原理先将酶与抗体结合形成酶标抗体,然后和相应的抗原反应,使抗原抗体复合物上带有酶分子,再与酶的底物H2O2—DAB(3’3—二胺荃联苯胺)发生显色反应,在显微镜下观察,根据颜色产物检测相应抗原。
实验材料

抗体

试剂、试剂盒

PBSH2O2血清

仪器、耗材

显微镜

实验步骤

1.  标本固定;


2.  PBS洗涤2×3 分钟;


3.  1 %H2O2(或1 %H2O2甲醇)抑制内源性过氧化物酶,室温10~20 分钟;


4.  正常血清(1:10)孵育,室温20 分钟;


5.  滴加酶标记的抗体37 ℃1 小时或4 ℃过夜;


6.  PBS洗3×3 分钟;


7.  DAB+H2O2显色5~10 分钟,镜下控制染色结果。DAB+H2O2应于用前15 分钟配制。


8.  充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检。

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注意事项

直接法的优点是特异性高,非特异性染色轻,缺点是敏感性低,必须对第一种抗体都进行标记,操作不便,目前只用于单克隆抗体的筛选及酶联免疫吸附试验。


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