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抗体
PBSH2O2血清
显微镜
1. 标本固定;
2. PBS洗涤2×3 分钟;
3. 1 %H2O2(或1 %H2O2甲醇)抑制内源性过氧化物酶,室温10~20 分钟;
4. 正常血清(1:10)孵育,室温20 分钟;
5. 滴加酶标记的抗体37 ℃1 小时或4 ℃过夜;
6. PBS洗3×3 分钟;
7. DAB+H2O2显色5~10 分钟,镜下控制染色结果。DAB+H2O2应于用前15 分钟配制。
8. 充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检。
直接法的优点是特异性高,非特异性染色轻,缺点是敏感性低,必须对第一种抗体都进行标记,操作不便,目前只用于单克隆抗体的筛选及酶联免疫吸附试验。
原国家质检总局 教授