液相色谱仪的日常维护及应注意事项
(一)液相色谱柱的日常维护
表4 液相色谱中对流动相的要求
(1)溶剂必须“干净”,在使用前需经过滤板除去颗粒杂质,必要时,在进样口再加有块滤 板,以除去可能由泵带来的颗粒 (2)必须控制吸附色谱中溶剂的含水量,过量水会使吸附剂活性降低,溶质保留值下降 (3)如需在一定PH值下操作,须定期测定流动相的PH值,大气中的CO2溶解在流动相内将引起PH值的改变,特别是贮液瓶密闭不严时这种影响可能更大 (4)软质或半软质填料的溶胀率随溶剂极性的变化而变化,使用新柱时应先用25~30倍柱容积的合适流动相平衡;更换流动相时,如果两种流动相不互溶,需采用过滤溶剂使前一种流动相逐步溶解除去(例如,2、2、4-三甲基戊烷换成甲醇时,必须用乙酸已酯或其他溶剂过渡,直到标准物保留值达到稳定状态) (5)为延长不易装填、价格昂贵的高效柱寿命,可在进样器和色谱柱之间安装预柱(预柱应有足够的杂质容量),对流动相和样品中的颗粒和杂质进行最后的过滤;在填充和连接预柱时,不应有额外造成谱带变宽、分离度下降的死体积;预柱与色谱柱的体积之比应保持为1:15至1:25,以减少谱带变宽 |
表1-5 液相色谱柱的日常维护
(1)每次开机时,流速和柱压要逐渐增加,突然迅速增加,会使柱床受到冲击,引起紊乱,产生空隙 (2)在进样前使色谱系统充分平衡,是否平衡可由基线加以判断 (3)在进样前,检查色谱系统的各个接头,通常由此能发现是否有漏液现象。如有漏液,空气会从漏缝进入系统引起基线漂移,影响峰高和峰面积的重复性 (4)不要把柱接头上得太紧,否则易损坏接头螺纹,引起渗漏 (5)不要把柱子放在有气流的地方或直接放到阳光下,气流和阳光都会使柱子产生温度梯度造成基线漂移;如果怀疑基线漂移是由温度梯度引起的,可以设法使柱子恒温 (6)若仪器用做常规分析,样品种类有限,但分析次数很多,则不妨为每一类常规分析配置一根专用柱,这样有助于延长柱寿命 (7)如果怀疑样品会污染色谱柱,可以用合适的溶剂(几百毫升)慢慢冲洗柱子过夜,第二天早晨再用流动相重新平衡柱子(约3min) (8)在因装卸、更换、贮存等而挪动柱子时,动作要轻,不要使其受到碰撞,以免柱床因震动产生空隙或通道 (9)柱要加标签,新旧分开,不要放在温度变化很大的地方 (10)柱子不用或贮藏时,应封闭并贮存在惰性溶剂中(见表1-4) |
表1-6 固定相的封存与禁用溶剂
固定相 | 硅胶、氧化铝、正相键合相 | 反相色谱填料 | 离子交换填料 |
封存溶剂 禁用溶剂 | 2、2、4-三甲基戊烷 二氯代烷烃、酸、碱性溶剂 | 甲醇 — | 水 — |