单胞菌（monad）的人工感染与分离（1）
一、实验目的
熟悉单胞菌的形态特征及培养特点，鱼类病原菌分离鉴定的基本方法，巩固单胞菌所致鱼病的基本特性及症状。
二、实验材料
单胞菌株纯培养物 普通琼脂平板 鲜血琼脂平板 普通肉汤 无菌蒸馏水 解剖刀 剪刀 镊子 纱布 白瓷盘 洁净的玻片 平皿 光学显微镜 一次性注射器
针头 记号笔 酒精棉球 饵料 玻璃注射器 水族箱 气泵 控温仪 吸管 洗耳球 灭菌试管 实验用鲫鱼 生理盐水 温度计 捞网
三、实验操作程序
1 ．单胞菌株的纯培养
[ 培养基 ]
（ 1 ）普通肉汤培养基： 按以下剂量称取各种试剂（先称取盐类再称蛋白胨及牛肉膏），置于铝锅或搪瓷缸中。
牛肉膏 5g 磷酸氢二钾 1g
蛋白胨 10g 蒸馏水 1000ml
氯化钠 5g pH 7 . 4 ～ 7 . 6
初配好的培养基呈酸性故要用 NaOH 调整。将 pH 测定后的肉汤培养基用滤纸过滤，将过滤好的肉汤分装试管、盐水瓶、三角烧瓶等容器，待灭菌。
（ 2 ）普通营养琼脂培养基
普通肉汤 1000ml
琼脂 20g
琼脂是由海藻中提取得一种多糖类物质，对病原性细菌无营养作用，但在水中加温可融化，冷却后可凝固。在液体培养基中加入琼脂 1 . 5 ～ 2 ％即可固定培养基，如加入 0 . 3 ～ 0 . 5 ％则成半固体培养基。
将称好的琼脂加到普容肉汤中，加热煮沸，待琼脂完全融化后，将 pH 调至 7 . 4 ～ 7 . 6 。琼脂融化过程中需不断搅拌，并控制火力，不使培养基溢出或烧焦，并注意补充蒸发掉的水份。
加热溶解好的培养基可用滤纸进行过滤，固体培养基要用 4
层纱布趁热过滤（切勿使培养基凝固在纱布上），之后按实验要求，将配制好的培养基分装入试管或三角瓶中，包扎好待灭菌，将培养基置于高压蒸汽锅内，
121 ℃ 灭菌 15 ～ 30min ，趁热将试管口一端搁在玻棒上，使之有一定坡度，凝固后即成普通琼脂斜面，也可直立，凝固后即成高层琼脂。
盐水瓶中的普通琼脂已手掌感触，若将瓶紧握手中觉得烫手，但仍能握持者，此即为倾倒平皿的合适温度（ 50 ～ 60 ℃ ），每只灭菌培养皿倒入约 15 ～ 20ml ，将皿盖盖上，并将培养皿于桌面上轻轻回转，使培养基平铺于皿底，即成普通琼脂平板。
培养基中的某种成分，如血清、糖类、尿素、氨基酸等在高温下易于分解、变性，故应过滤除菌，再按规定的量加入培养基中。
