高效液相色谱仪的高压输液系统和进样系统
一、高压输液系统
除高压泵的主要部件外，高压输液系统还包括一些辅助装置，如流动相罐、脱气装置、梯度洗脱装置等。为了去除流动相中的溶解气体（氧气和氮气），通常使用真空泵为存储设备配备脱气设备。梯度洗脱装置的作用是随时间改变流动相的组成，调节流动相的极性、离子强度或酸碱值，从而改变样品组分的相对保留率，提高分离效率。梯度洗脱有两种方式：一种是低压梯度洗脱，其中大气压和低压溶剂按一定比例混合，然后通过高压泵（也称为外部梯度）输入色谱柱；另一种是高压梯度洗脱，也称为高压梯度洗脱。称为内部梯度。
高压泵的输出压力通常为150-500kg / cm2。 （1kg / cm 2 = 98.0665kPa），流速为0.01至10ml / min。高压泵的要求是恒定流量，无脉动和可调流量。普通高压泵有往复泵，柱塞往复泵，液体由单向阀控制，液体排出，输出液压和流量有一定的脉冲。通常，使用双泵或多泵系统，并且添加阻尼装置以增加输出压力。而且流量稳定。此外，柱塞泵具有较高的往复频率，对泵的密封，结构，材料和加工有特殊要求。
二、进样系统
样品引入系统是将待分析的样品引入柱中的装置。采样装置应满足柱系统的要求，柱中心重复性好，死体积小，流量波动小，易于自动化。采样系统包括采样和采样功能，两者都具有手动和自动功能。
1.注射器注射装置
注射器注射装置是指用注射器穿透弹性隔膜后直接注射柱头。这种进样方法适用于低压，已不再用于现代高效液相色谱仪分析。
2．阀进样装置
阀门喷射装置适用于高压喷射。阀门喷射装置由高压六通阀和定容定量管组成。阀体由不锈钢制成，内壁经过精密加工。旋转密封件由铝合金陶瓷材料或聚四氟乙烯制成，具有良好的耐磨性和密封性能。在注射时将样品填充到定量管中，然后通过切换阀注射。通过选择不同体积（1-103μl）的定量管可以改变样品的大小。
3．自动进样器
在程序控制器或计算机的控制下，自动采集仪可以自动完成采样、清洗等一系列操作。
第四章。采样技术对峰值扩展的影响
植入技术对峰值扩张的影响包括注射量，注射时间，样品浓度，选择的注射装置，注射模式和植入位置。注射量通过常规组件以减少柱效应和宽峰值失真。注射时间越短越好。但它更难以控制。样品浓度倾向于使柱头饱和，导致光谱峰的严重变宽和分离程度的降低。高效液相色谱仪的螺柱过载不仅与固定相有关，而且与溶质和溶剂的性质有关。一般认为，较大的稀溶液注入高效液相色谱仪的色谱柱的容量要优于较小的浓溶液，即样品浓度对峰展宽的影响比样品体积的影响更为重要。
由于高效液相色谱柱比气相色谱柱短得多，因此注入系统和检测器中的死体积对峰展宽的影响较大。为了克服柱头的增大，高效液相色谱法对注射有严格的要求。无论是哪种注射，都需要精确的注射和良好的重复性。
色谱柱是高效液相色谱(HPLC)的核心部分。高效液相色谱仪色谱柱的一般要求是柱效高,选择性好,分析速度快。分析柱的长度一般为10-50cm，内径为2-5mm，色谱柱内径为25mm。直柱管由不锈钢或硬质玻璃制成。使用玻璃柱时，应注意其抗压强度。高效液相色谱仪的色谱柱两端安装有烧结不锈钢或多孔聚四氟乙烯过滤器。色谱柱前通常设有预柱。柱内填料与分析柱相同，但粒径较大。其目的是去除流动相中的杂质，以避免分析柱受到污染。同时，流动相可预先被前柱中的固定液饱和，以减少流动相在分析柱中流动时的固体洗脱。固定液，起到防止固定液流失的作用。
由于色谱柱技术的发展，微米级色谱柱的开发促进了色谱仪器的开发，使用更多内径小于2 mm的色谱柱，实现更高的压力和更快的性能。由于微米柱中的固定相颗粒比传统的高效液相仪的色谱柱中的固定相颗粒更细，更均匀，因此对高效液相色谱仪的各个方面提出了更高的要求，导致各种超高压力。高效液相色谱法。
检测系统
高效液相色谱法对检测器的要求与气相色谱法完全相同。它死区小，噪声低，基线稳定，灵敏度高。
高效液相色谱检测器的分类
常用的探测器一般分为两类：普通探测器和专用探测器。
（1）通用检测
一般的检测器都能连续测量塔出水的各种特征变化，通常采用差分测量法。该探测器具有差分折射探测器、蒸发光散射探测器、介电常数探测器、电导探测器和近年来发展起来的磁光旋转探测器。通用探测器的应用范围很广，但由于其对流动相的响应，易受温度、速度和流动相组成变化的影响。它们具有高噪声和漂移，以及低灵敏度。一般来说，它们不适合梯度洗脱。质谱检测器是最好的通用检测器。由于接口技术的改进和自身的特点，目前还没有通用的检测器。采用高效液相色谱仪-质谱法对质谱仪进行了详细的描述。
（2）专用探测器
专用检测器用于测量待分离部件的特性的变化。这种检测器对样品组成中的某些物理或化学变化敏感，这些变化在流动相中不可用，或者至少在操作条件下不可用。这些检测器包括高效液相色谱仪中的紫外检测器、荧光检测器、极性光谱检测器、辐射检测器等。
