最前沿的样品前处理技术介绍（三）
Fe3O4 @SiO2@C18疏水有机功能层磁性微球
Fe3O4@C@CHI制备流程图
化学键合法制备离子液体磁颗粒
磁性氧化石墨烯复合材料(生物样品中重金属离子分析的前处理)
氨基酸修饰的磁性氧化石墨烯AMGO/Fe3O4
吸附剂对牛血红白蛋白具有选择性吸附作用
4.渗析(透析)
• 渗析现象：半透膜两侧分别放置溶液和纯水，或者在膜两侧放置不同浓度的溶液，只有溶液中的小分子可以穿过半透膜，从高浓度一侧向低浓度一侧移动。
• 渗析是受扩散控制，以浓度梯度为驱动力的膜分离方法。
• 渗析与渗透本质上相同，但所用膜不同。渗透膜不允许溶质通过，只有溶剂通过;而渗析膜允许小分子溶质通过。
• 用于清除蛋白质溶液中的盐类等小分子杂质;在医学领域用于血液透析。
微透析技术
u 微透析针插入活体动物组织，灌流液由注射器推入膜内套管，体液中小分子、离子扩散穿过透析膜进入采样针内(阻止蛋白质等大分子通过)。
微透析技术的特点
ü 活体(In vivo)、实时(In time)、在线(On line)
v 时间分辨性(不同时间物质含量的变化)。
v 空间分辨性(不同器官、组织部位物质含量的变化)。
v 提供游离态小分子化合物,对药物研究有重要意义。
v 样品因不含蛋白质、酶等大分子物质，可不经预处理直接用于IC、HPLC测定。
û 不足: 回收率低,通常在15%左右。
微透析作为ESI-MS除盐接口
5.亲和分离技术
• 亲和作用：通常指生物分子之间的特异性相互作用。如抗原与抗体、酶与底物、核酸与互补碱基链之间。
• 亲和分离材料：含亲和功能基团的材料。如膜、吸附剂。
• 亲和分离方法：亲和SPE、亲和色谱、亲和膜分离、亲和层析、亲和沉淀、亲和萃取、亲和过滤。
亲和配基
u 天然特异性配基：如免疫亲和配基(抗体与抗原)。
u 天然基团性配基：核苷酸、凝集素、苯甲醚、肝素、硼等。
u 人工合成配基：生物活性染料及金属离子。
u 天然配基对特定生物分子具有内在的生物特异性作用，而合成配基则需通过优化偶合和洗脱条件来实现其特异性作用。
u 天然配基性能优于合成配基，但天然配基制取提纯困难、价格昂贵、使用条件苛刻。实际多使用量大且便宜的配基，如生物活性染料，其可与多种脱氢酶、碱性磷酸酯酶、羧肽酶、白蛋白等结合。
亲和膜分离
n 利用膜的孔径大小及亲和基团的生物特异选择性，不受相对分子量大小的限制。
n 原则上讲，只要选择合适的膜，共价键合上能与目标物质产生亲和相互作用的配位基，就可以从复杂体系，尤其是细胞培养液和发酵液中分离和制备出任何一种目标物。
亲和膜分离原理
亲和膜超滤
• 膜孔径30-100nm。样品溶液流过膜时，与配基产生亲和作用的分子被截留在膜上,其他生物大分子顺着液流进废液槽;而部分溶剂则透过膜流到溶剂槽中。
• 优点：不仅目标生物大分子可与和其他分子分离，而且同时可去除部分溶剂(浓缩)。
亲和膜微滤
• 孔径在0.3~3μm。能与配基产生亲和作用的生物分子被膜上的配基“抓住”，其他分子和溶剂透过膜。
• 用合适的顶替试剂洗脱后分析，进一步用透析、凝胶过滤等除掉小分子后在分析。
免疫磁珠(ImpetiCbead，IMB)分离
• 免疫磁珠是一项新的免疫学技术，它将固化试剂特有的优点与免疫学反应的高度特异性结合于一体，以免疫学为基础，渗透到病理、生理、药理、微生物、生化以及分子遗传学等各个领域，其在免疫检测、细胞分离、生物大分子纯化和分子生物学等方面得到了越来越广泛的应用。
免疫磁珠分离原理
• 以表面覆盖高分子材料的超顺磁性颗粒(数十nm至数μm)为核，利用核表面的功能基团(如氨基、羧基、巯基等)将抗体(或抗原)修饰在颗粒表面，用于特异性吸附相应的抗原(或抗体)。
• 通过外加磁场使吸附了目标物的磁珠从样品溶液分离出来，洗脱后分析。
• 应用：基因、蛋白质、细胞、微生物等的分离纯化。
6.在线燃烧炉消解
特点与应用
• 分析对象：难降解样品中卤素与硫的分析。
• 特点：全自动，消解彻底，全封闭体系目标组分物损失。
• 应用领域：环境(塑料废弃物、活性炭)、能源(油品、煤炭)、电子(电路板、树脂、线缆、绝缘材料)、新材料(高分子聚合物、石墨烯、OLED)、食品(油脂、香料、调味品)、制药(原料、中间物、成品)、矿物。
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