使用表面带电杂化(CSH)C18色谱柱提高反相肽分离的峰容量1
应用优势
反相肽分离的峰容量更高
与甲酸流动相兼容
有应用于UPLC®和HPLC的两种颗粒
CSH130 C18 使用细胞色素c 的胰蛋白
酶消化液进行QC检验
沃特世解决方案
ACQUITY UPLC® H-Class Bio系统
Xevo® G2 QTof质谱仪
ACQUITY UPLC CSH130 C18，1.7 μm色谱柱
XSelect™ CSH130 C18 XP，2.5 μm色谱柱
MassPREP™肽混合物
经LCGC认证的内插管透明玻璃样品瓶
关键词
反相、肽、三氟乙酸(TFA)、甲酸(FA)、离子对、表面带电杂化(CSH)、峰容量
引言
无论是通过自上而下的蛋白质组学对蛋白质进行研究1还是运用肽图表征生物药物2，肽分离技术都极其重要。这些分析中所遇到的混合物均具有内在的复杂性。因反相(RP)色谱法具有较高的分辨率，并且能够轻松地与质谱法(MS)衔接，它已成为首选的分离方法。与梯度反相色谱关系最紧密的性能指标是峰容量，或在梯度时间内的最大峰数量3。有趣的是，除使用较小的填料颗粒外，对固定相进行化学修饰也可以对峰容量产生显著的影响。例如，表面带电杂化(CSHTM)C18色谱柱的化学特性是对亚乙基桥杂化(BEH)C18固定相的改进4，因为除了C18键合相外，其表面经修饰后还带有低水平的正电荷5。业已表明，这种修饰能够改善离子化小分子的峰形、载量行为和峰容量5-10。
在本研究中，我们评估了CSH130 C18的肽分离特性，期望能够在色谱性方面得到相似的改善，因为在常用的酸性条件下，大部分肽都带有正电荷。针对肽所做的研究表明，与肽分析中先进的固定相相比，这种新型的固定相能够具有更大的峰容量、独一无二的选择性，并且对MS信号的依赖性更低。
LC条件
实验
系统：Waters® ACQUITY UPLC H-Class Bio系统，配有一个20 cm或30 cm的柱温箱(150 mm色谱柱采用20 cm柱温箱；250 mm色谱柱采用30 cm柱温箱)
检测：配备500 nL分析流通池的ACQUITY UPLC TUV检测器；Xevo G2 QTof质谱仪
波长： 214 nm
扫描速率 ： 10 Hz
色谱柱:
ACQUITY UPLC BEH130 C18，2.1 x 150 mm，1.7μm，多孔型，130 Å(部件编号186003556）
ACQUITY UPLC BEH130 C182.1 x 150 mm，1.7 μm，多孔型，130 Å (部件编号186006938)
XSelect CSH130 C18 XP，2.1 x 150 mm，2.5 μm，多孔型，130 Å (部件编号186006943)
C18，2.1 x 250 mm，5μm，多孔型，300 Å(竞争厂家产品)
C18，2.1 x 150 mm,1.7μm，表面多孔型(核心1.25μm，外壳0.22μm)100 Å(竞争厂家产品)
柱温： 40 °C
样品温度： 10℃
进样量： 10 μL
流速： 0.3 mL/min
流动相： A：0.1%FA(v/v)水溶液 B:0.1%FA(v/v)的乙腈(ACN)溶液 C：0.1%三氟乙酸(TFA)(v/v)水溶液 D：0.1%TFA(v/v)的乙腈溶液
样品瓶： 经LCGC认证的透明玻璃瓶12 x 32 mm螺纹口样品瓶(部分编号186001126C)
梯度： 2% ACN维持1分钟，然后增加至50% ACN，维持60 分钟（酸组分由定量配比的流动相A/B和C/D控制)。
质谱条件
质谱仪： Xevo G2 Qtof
电离模式： ESI+
分析仪模式： 分离度
毛细管电压： 3.00 Kv
锥孔电压： 25 V
离子源温度： 120 ℃
脱溶剂温度： 350℃
锥孔气体流速： 0.0 L/h
脱溶剂气体流速：800 L/h
校正： NaI 2 μg/μL，50 ~ 2000 m/z
采集： 50 ~ 1990 m/z，10 Hz 扫描速率
数据管理： MassLynx®软件
样品描述
如表1所示，MassPREP肽混合物(部件编号186002337)使用0.1%FA水溶液重新溶解，使总肽浓度大约为0.6 mg/mL。
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焦点事件
