PHA淋巴细胞转化试验的检查过程
操作方法：
1.取无菌肝素抗凝血0.lml，加入1.8ml细胞培养液中，同时加入1 000μg/m1 PHA 0.1m1，对照管不加PHA，将细胞置37℃、5%CO2培养3d，每天摇动1次。
2.培养结束时吸弃大部分上清液，加入8.5g/L NH4Cl 4ml混匀，置37℃水浴10min。
3.2500r/min离心10min，弃上清液，沉淀加5ml固定液，室温作用5min。
4.2500r/min离心10min，弃上清液，留0.2ml沉淀细胞制片，迅速吹干。
5.吉姆萨染液染色 10-20min，水洗，干燥。
6.油镜计数200个淋巴细胞中转化的细胞数，计算转化率。
结果判断：
1.淋巴母细胞的形态学标准 细胞核的大小、核与胞浆的比例、胞浆染色性及核的构造与核仁的有无。
⑴成熟的小淋巴细胞：与未经培养的小淋巴细胞大小一样，为6-8μm，核染色致密，无核仁，核与胞浆比例大，胞浆染色为轻度嗜碱性。
⑵过渡型淋巴细胞：比小淋巴细胞大，约10-20μm，核染色致密，但出现核仁，此为与成熟小淋巴细胞鉴别要点。
⑶淋巴母细胞：细胞体积增大，约20-30μm，形态不整齐，常有小突出，核变大，核质染色疏松，有核仁1-2个，胞浆变宽，常出现胞浆空泡。
⑷其它细胞：如中性粒细胞在培养72h后，绝大部分衰变或死亡呈碎片。
2.淋巴细胞转化率的计算 按上述分类检查推片头、体、尾三部分，计数200个淋巴细胞，算出百分率。转化的淋巴细胞包括淋巴母细胞和过渡型淋巴细胞，未转化的淋巴细胞指的是成熟的小淋巴细胞。在正常情况下，PHA诱导的淋巴细胞转化率为60-80%，如为50-60%则偏低，50%以下则为降低。
再根据结果得出正确的判断。
推荐
