关于多肽的合成过程介绍
除去保护
Fmoc保护的柱子和单体必须用一种碱性溶剂（piperidine）去除氨基的保护基团。
激活和交联
下一个氨基酸的羧基被一种激活剂所激活。化学工艺常用HBTU/HCTU/HITU/HATU+NMM/DIPEA或HOBT+DIC作激活剂，激活的单体与游离的氨基反应交联，形成肽键。在此步骤使用大量的超浓度试剂驱使反应完成。循环：这两步反应反复循环直到合成完成。 氨基酸缩合结束后，可用适量TFA进行洗脱，根据起酸碱性，可选择10%TFA/DCM溶液，至100%TFA，以此类推。
HPLC分析纯化
分析HPLC使用柱子和泵系统，可以经受传递高压，这样可以用极细的微粒（3-10μm）做填料。由此多肽要在几分钟内高度被分析。HPLC分两类：离子交换和反相。 离子交换HPLC依靠多肽和固相间的直接电荷相互作用。柱子在一定PH范围带有特定电荷衍变成一种离子体，而多肽或多肽混合物，由其氨基酸组成表现出相反电荷。分离是一种电荷相互作用，通过可变PH，离子强度，或两者洗脱出多肽，通常，先用低离子强度的溶液，以后逐渐加强或一步一步加强，直到多肽火柱中洗脱出。离子交换分离的一个例子使用强阳离子交换柱。如sulfoethylaspartimide通过酸性pH中带正电来分离。
反相HPLC条件与正常层析正相反，多肽通过疏水作用连到柱上，用降低离子强度洗脱， 如增加洗脱剂的疏水性。通常柱子由共价吸附到硅上的碳氢烷链构成，这种链长度为G4-G8碳原子。 由于洗脱是一种疏水作用。长链柱比短链对小的， 高带电肽好。另一方面大的疏水肽用短链柱洗脱好。 然而，总体实践中， 这两类柱互变无多少显著差别，别类载体由碳水化合物构成， 比如苯基。
典型的操作常由两绶冲剂组成，0.1%TFA-H2o和80% acetonitrile 0.1%TFA--H2o稀acetonitrile。用线型梯变以每分钟0.5%到1.0%改变的速度混合。常见分析和纯化用柱为4.6×250mm（3-10μm）和22×250mm（10μm）。如果用径向填柱，那么大小是8×100（3-10μm）和25×250mm（10μm）。
大量各种缓冲剂含许多不同试剂，比如磷酸、NH4HCO3、 醋酸钠、TFA/TEA，磷酸钠、异戊酚等。这样许多不同组合可形成缓冲剂，但要注意：硅反相柱料不能长时间暴露于高pH，甚至微碱pH， 因为这样会破坏柱子。
不要把肽含量和纯度搞混了，肽的纯度可能是100%， 而肽含量相关带电基团（如Arg, Lys ）的抗离子量和肽亲水性决定，这是合成肽的本身特性。
