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微载体细胞计数的难题与解决方案

2020.5.18

细胞和病毒生产的放大培养面临挑战。当需要生产量增加千倍时,细胞培养瓶对于工业规模生产是不可行的。

微载体为生物反应器中贴壁细胞的生长提供了方便, 微载体充当贴壁细胞可附着的支架,允许它们增殖,而生物反应器使细胞-微载体复合体自由悬浮在培养基中。因此,贴壁细胞也可以像悬浮细胞那样生长,从而简化了放大培养,并允许利用现有的资源用于过程优化和生产。

微载体细胞计数的难题

细胞计数和活力是优化和监测大规模生物生产的关键参数。 

传统方法的微载体的细胞计数耗时耗力,且计数结果不准确,需要离心样品、PBS重悬、胰蛋白酶消化细胞和台盼蓝或者结晶紫染色等多个步骤来计数在微载体上生长的细胞。

细胞计数影响因素:                        
    步骤多,消耗时间长
    细胞结团问题
    胰酶消化不完全
    细胞释放不完全
    微载体干扰细胞计数结果

 

NucleoCounting提供微载体细胞计数难题解决方案

Nucleocounting是一种微载体细胞计数和活力分析的精确可靠的方法。Nucleocounting方法通过荧光染色细胞核的方法检测细胞,这些细胞用荧光染料DAPI进行标记,DAPI高度特异结合DNA,即使在有细胞碎片的情况下,也能精确检测细胞核。

 

通过独特的预包埋有荧光染料的Via1-Cassette™将细胞上样、荧光染色、腔体细胞计数组合到一个工作流程,然后将Via1-Cassette™装载到计算细胞数量和存活率的NucleoCounter® NC-200™机器卡槽中。

NucleoCounting节省微载体细胞计数的时间,计数精确可靠

与传统的胰蛋白酶消化方法相比,NucleoCounting工作流程的去除了几个离心,移液和孵育步骤。 整个细胞计数过程在不到5分钟内完成。

ReagengA100 可以完全将细胞从微载体上消化下来,消除细胞结团的影响。此外,微载体不含细胞核,不会被DAPI染料计数,不干扰细胞的计数结果。



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