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血细胞计数板的计算方法

2023.6.01

血细胞计数板的计算方法(高中生物)如下:

计数室的刻度一般有两种规格,一种是一个大方格分成16个中方格,而每个中方格又分成25个小方格,共400小格;另一种是一个大方格分成25个中方格,而每个中方格又分成16个小方格,总共也是400小格。

我们数的是每个小格中的细胞数,要算一个大格中的细胞数,一个大格中有400个小格,所以要乘以400。

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每一个大方格边长为1㎜,则每一大方格的面积为1㎜2,盖上盖玻片后,载玻片与盖玻片之间的高度为0.1㎜,所以计数室的容积为0.1㎜3。其计算方法如下:

1.16×25的计数板计算公式:

细胞数 ml=(100小格内的细胞数 100)×400×1000×稀释倍数

2.25×16的计数板计算公式:

细胞数 ml=(80小格内的细胞数 80)×400×1000×稀释倍数

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操作方法:

1.视待测菌悬液浓度,加无菌水适当稀释(斜面一般稀释100倍),以每小格的菌数可数为度。

2.取洁净的血球计数板一块,在计数区上盖上一块盖玻片。

3.将菌悬液摇匀,用滴管吸取少许,从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴(不宜过多),让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区,勿使气泡产生,并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。

也可以将菌悬液直接滴加在计数区上(不要使计数区两边平台沾上菌悬液,以免加盖盖玻片后,造成计数区深度的升高),然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。

4.静置片刻,使细胞沉降到计数板上,不再随液体漂移。将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳,先在低倍镜下找到计数区后,再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近,观察时应减弱光照的强度。

5.计数时若计数区是由16个中方格组成,按对角线方位,数左上、左下、右上、右下的4个中方格(即100小格)的菌数。如果是25个中方格组成的计数区,除数上述四个中方格外,还需数中央1个中方格的菌数(即80个小格)。

6.对于出芽的酵母菌,芽体达到母细胞大小一半时,即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3次(每次数值不应相差过大,否则应重新操作),按公式计算出每mL(g)菌悬液所含细胞数量。

7.测数完毕,取下盖玻片,用水将血球计数板冲洗干净,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干,放入盒内保存。


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