精子凝集试验的检查过程
明胶凝集试验(gelatin agglutination test,GAT)
【准备】
(1)配制 Baker液(Bakersolution);
葡萄糖3.00gNa2HPO4·7H2O0.46g;
NaCl0.20gKH2PO40.01g;
加双蒸水至100mL。
(2)用 Baker液配制10%白明胶溶液,并置37℃水浴中备用。
(3)精子悬浮液:取正常新鲜精液(精子密度为80×106/mL 左右,活动率>60% ,a、b两级活动精子 >70% ),室温液化,用 Baker液稀释至40×106/mL,置37℃水浴中保存备用。
(4)待检血清及对照血清处理,均经56℃水浴加热30min,以灭活补体。随后用Baker液,将两种血清均作1∶4~1∶32倍数稀释,存放于37℃水浴中备用。
【方法】
(1)取一定量的精子悬浮液,加入等量的10%明胶溶液,充分混合后,取0.3mL分别加入装有0.3mL对倍稀释血清的各支小试管内,并使其充分混合。
(2)将混合液分别用毛细吸管移置另一小试管(3mm ×30mm)内,37℃ 孵育2h,移置4℃放置5min,待明胶凝固后,观察明胶内精子凝集情况,并判断结果。
【判断】
(1)阴性:精子在明胶内均匀分散,若以黑纸作背面对光观察,呈均匀乳白色,不见凝集块。
(2)阳性:精子成小凝集块,对光观察可见小凝集块有如雪花纷飞状,不难鉴别。
(3)抗体效价:以阳性反应的最高血清稀释倍数为血清凝集抗体效价。
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