凝胶阻滞
一、原理
电泳迁移率分析，也可称作迁移电泳，凝胶电泳分析，凝胶迁移率分析，条带移动分析或者凝胶阻滞分析，这种方法常用来研究蛋白质-DNA，蛋白质-RNA的相互作用，对照泳道（不含蛋白质的DNA/RNA探针）将出现单一的条带。如果蛋白质与片段结合，形成大的复合物，因此在凝胶上迁移的速度慢从来迁移率减低。
二、材料和试剂
1. DTT（Promega）
2. poly-dIdC（Sigma）
3. 32P-labeledprobe
4. BSA（Sigma）
5. 常用化学品试剂（Sigma）
6. 滤纸（GEHeathcare）
三、步骤
1. 制备聚丙烯酰胺凝胶
（1）装配板，垫片，及夹具。用1%琼脂糖封闭底部与侧面，防止胶漏。
（2）5%聚丙烯酰胺凝胶的制备
| Platesize | Large | Medium |
| H2O | 78 mL | 39 mL |
| 10×TBE | 5 mL | 2.5 mL |
| 30%丙烯酰胺（19：1） | 16.6 mL | 8.4 mL |
| 10%过硫酸铵 | 1000 uL | 500 uL |
（3）混匀，尽量减少泡沫的形成。加100 uL/50 uLTEMED。
（4）混匀后倒入胶板，插梳子。凝胶聚合大概需10分钟。
（5）聚合后，凝胶可用塑料膜包裹后4℃保存。
2. 制备5×结合缓冲液。
3. 结合反应
1 uL poly-dIdC（1ug/uLinTE）
2 uL 5x结合缓冲液
1 uL 标记探针
如有必要加1uL未标记的DNA探针片段（如竞争试验）
0.1 uL 100xBSA
若干体积（uL）的核提取物（5ug总蛋白）
加H2O到10 uL 总体积
室温孵育30分钟。如有必要可再加入蛋白抗体，使阻滞更加明显，加抗体后再室温孵育30分钟。
4. 在结合反应孵育的过程中，将胶装在电泳槽，在0.5×TBE电泳缓冲液，150伏电压下，预跑30分钟，之后上样，150 V 电泳2小时。
5. 制干胶（可选）：将胶转移到滤纸上。胶上盖滤纸，80℃真空干燥器中干燥1-2小时。
6. 压片曝光在暗室中将胶放在暗盒中，放胶片。在-80℃条件下曝光。
