六孔板培养基在植物提取物细胞研究应用
来自巴西等国的科研人员在2019年第13期的《DRUG DISCOVERY》杂志上发表了题为“In vitro and In vivo Antiproliferative activity of extracts and fractions of leaves and stem from Tabebuia hypoleuca (C. Wright) Urb.”的文章。文中，科研人员使用中空纤维测试法（Hollow Fiber Assay，HFA）作为实验动物体内模型，以研究植物提取物的体内抗肿瘤细胞增殖活性。以下为原文内容简介，详细内容，请参考原文。
摘要：背景：Tabebuia hypoleuca （C.Wright）Urb. 是一种古巴特有的植物，之前没有被作为抗肿瘤药物进行研究，但该属植物被报导具有多种药理活性。目的：该项研究的目的是研究Tabebuia hypoleuca （C.Wright）Urb.提取物及其叶、茎部分的体外和体内抗增殖活性，并研究其茎的主要部分（TT2）的化学成分。方法：体外抗增殖活性在8种人肿瘤细胞系内进行。选择总生长抑制（TGI）值测量抗增殖活性。体内实验在载Ehrlich实体瘤的Swiss小鼠和载MCF7细胞的中空纤维测试法内进行。实验使用叶的乙酸乙酯粗提物（THA）、半纯化合物（TH 3-6和TT2-11）和阳性对照。结果：在所有评估的细胞系中，THA、THA（3-6）、TT2证实对肾、胶质瘤、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、结肠癌和白血病细胞系具有较高的体外抗增殖活性。相对对照组（生理盐水），THA、THA3-6腹腔给药可显著抑制肿瘤发展。结论：本研究表明，在T.hypileuca中存在不同的五环三萜类化合物，具有良好的抗肿瘤活性。进一步的研究将聚焦于确定这些化合物作用机制和毒性。
使用MCF-7（乳腺癌）进行的中空纤维测试法
研究在免疫完整的BALB/c小鼠内进行了MCF-7人肿瘤细胞系实验。细胞以正常条件培养，然后以标准的胰酶消解方法收获细胞，重悬至所需的细胞密度（1 x 10^5 cells/fiber，160μl培养基）。细胞悬液注射进中空纤维，然后热密封，剪成2cm的小段。纤维在含有培养基的六孔板内孵育24h，然后手术植入免疫完整的6-8周龄BALB/c母鼠体内。将含有MCF-7的三根纤维皮下植入小鼠侧腹。小鼠按30mg/kg 戊巴比妥钠（第0天）麻醉，切口缝合。同时制备体外对照纤维，实验过程中，在培养基内孵育（7天），作为动物植入时评估纤维内细胞数量的对照。细胞生长用MTT方法评估。
处理组每日给药THA、THA3-6、TT2，阴性对照组给药0.9%生理盐水+80%吐温，阳性对照组给药3mg/kg 阿霉素。第7天，小鼠安乐死，回收纤维。去除纤维上的宿主组织，将纤维转移至含有RPMI+FBS培养基的6孔板，加入MTT溶液，37℃避光孵育4h。吸取培养基，纤维保持在2.5%鱼精蛋白溶液中，于4℃孵育24h。纤维对半剪开，加入染色液，避光孵育4h。吸取150μL加入96孔板，分光光度计读数分析。
结果：在第7天回收纤维，定量检测细胞增殖。在150mg/kg/day的剂量条件下，叶的乙酸乙酯粗提取物可降低肿瘤细胞MCF-7的细胞增殖（59.1%），半纯化合物THA（3-6）处理降低43%，阿霉素可降低（60.6%），TT2（11）处理对该细胞增殖无影响。
动物可良好耐受中空纤维，未检测到排斥信号。以从T.hypoleuca获得的粗提取物和半纯化合物以及阿霉素处理不会超出接受限地影响小鼠状态，没有观察到死亡。粗提物或半纯化合物处理组没有观察到体重变化。此外，为评估与药物处理相关的毒性作用，对处理组的肝脏、肾脏、心脏、肺和脾进行了组织学分析，但结果显示粗提取物和半纯化合物对分析器官的形态无影响。
中空纤维测试法是一种标准的体内模型，可同时评估多种细胞系，其是由美国NHI开发的体内药物活性评估模型，相比移植瘤模型，可降低评估的时间，节省所需的化合物用量。
原文：L.M.S.Perera, A.I.R.Veloz, A.L.T.GoisRuiz, et al., In vitro and In vivo Antiproliferative activity of extracts and fractions of leaves and stem from Tabebuia hypoleuca (C. Wright) Urb..Drug Discovery, 2019, 13: 10-21.
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