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一抗的选择要点和技巧

2020.8.31

免疫组化实验是一种很严密的实验,对抗体的选择哪也有很高的要求,,免疫组化所有的抗体主要是一抗今天就让上海劲马与您一起分享如何选择免疫组化中的一抗,下面我们就从下面五点来论述一下这个问题。  

1.单克隆和多克隆抗体的选择。由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合,就像导弹精确地命中目标一样。另一方面,即使是同一个抗原决定簇,在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体,形成好几种单克隆抗体混杂物,称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中,一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异性稍弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高,但易出现非特异性染色(可以通过封闭等避免)。

2.应用范围的选择。有的一抗只能用于 WB ( Western blotting)或免疫组化、免疫荧光、免疫沉淀等;甚至表明石蜡切片或冰冻切片。

3.种属反应性的选择。这一点很重要,表明这种抗体可能存在种属差异,且这种抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原。

4.种属来源,一般兔来源的多是多克隆;而小鼠来源的多是单克隆,但也有另外。根据此来源来选择相应的二抗。

5.生产厂家的选择。如 ABCAM 公司抗体一般 1 ml,价格 4200元左右;而 chemicon 公司一抗一般 100 μl,价格 5200 元左右。这两个厂家的同一种抗体,它的实际效价稳定是不同的,我们的客户大部分用前面者抗体做免疫组化效果较好,而后者做 WB 效果还可以。


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