红细胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×) 操作步骤
、组织细胞样本的常规操作
1、制备细胞悬液: 新鲜组织经过胰蛋白酶或胶原酶等消化处理,通过适当方法制备成细胞悬液,离心弃上清。
2、裂解: 加入1×RBC Lysis Buffer,轻柔吹打混匀,裂解1~2min。 3、离心,弃红色上清。本步骤亦可在室温下操作。
4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3各一次。
5、洗涤:根据实验要求加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,轻柔混匀重悬沉淀。4℃离心,弃上清,该离心步骤亦可在室温下操作。
二、组织细胞样本的快速操作(无需洗涤)
1、制备细胞悬液:新鲜组织经胰蛋白酶或胶原酶等消化处理,制备细胞悬液,离心弃上清。
2、裂解:加入细胞5倍细胞沉淀体积的1×RBC Lysis Buffer,轻柔吹打混匀裂解。
3、加入PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,轻柔混匀。
4、离心5min,弃红色上清,本离心步骤亦可在室温下操作。
5、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2~4各一次。
6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀,进行计数、培养等后续实验。
三、血液样本的快速操作(无需洗涤)
1、新鲜抗凝血中加入10倍体积的1×RBC Lysis Buffer,轻轻吹打混匀,裂解4~15min。本操作步骤在4℃条件下操作更佳,亦可在室温下操作。
2、加入 PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,轻柔混匀。
3、离心,弃红色上清。4℃离心效果更佳。
4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。
5、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀,进行计数、培养等后续实验。
四、血液样本的常规操作
1、取新鲜抗凝血,离心,弃上清。
2、 裂解:加入1×RBC Lysis Buffer,轻柔吹打混匀,裂解1~5min。本操作步骤在4℃条件下操作更佳,亦可在室温下操作。
3、离心:弃红色上清。本步骤亦可在室温下操作。
4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。
5、洗涤: 根据实验要求加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,轻柔混匀重悬沉淀;4℃离心,弃上清,该离心步骤亦可在室温下操作。
6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀,进行计数、培养等后续实验。