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关于食品化学分析中HPLC方法

2020.7.21

　　自HPLC仪问世以来，其硬件技术、分析方法及应用研究发展迅速。本文仅就在食品化学分析中，HPLC分析技术与应用进展概述如下。

　　HPLC分析方法进展

　　● 液-固色谱法（LSC） LSC是根据组分基团对吸附剂表面亲和力的大小，决定了其保留程度。在LSC色谱中应用广泛的极性固定相是硅胶。

　　● 反相色谱法（RPC） RPC是指在非极性固定相上的液相色谱法，固定相多为化学键合相。其代表为ODS。目前，某些极性键合相，如氨基键合相也广泛应用于反相色谱中。反相色谱可分离离子型和非离子型化合物。据统计，在食品化学HPLC分析中，90%以上的分析过程都是反相色谱法。

　　● 离子对色谱（IPC） IPC又称为离子对分配色谱，是近年来发展较快的一种色谱技术。目的是应用液-液分配色谱实现对强电解质和弱电解质混合物，或对电解质和非电离物质混合物的分离。IPC根据固定相和流动相的相对极性分为正相和反相方式，但反相IPC应用较多，如氨基酸、多肽、核酸、各种药物、有机酸的分析。

　　● 离子色谱法（IC） IC法是HPLC中用于分离分析离子型化合物的方法，按分离机理的不同，IC可分为高效离子交换色谱法（HPIC）、高效离子排斥色谱法（HPICE）和流动相离子色谱法（MPIC）。HPIC主要用于亲水阴、阳离子和碳水化合物的分离；HPICE多用于无机弱酸、有机酸、氨基酸、醛、醇的分离；MPIC可用于疏水性阴、阳离子和过渡金属配合物的分离。IC分析多种阴离子快速、灵敏、选择性好。目前许多国家建立了采用IC法测定水质中阴、阳离子的标准检验法；AOAC已批准四项用于食品分析的IC法。

　　● 反相胶束色谱法（RPMC）在反相离子对色谱中，当反离子采用表面活性剂超过一般离子对色谱所用的浓度时（达0.02～0.2mol/L），此时的反相色谱称为RPMC。RPMC分为正反相胶束色谱。特点是具有高度的选择性，有利于梯度洗脱，提高了检测灵敏度。主要应用于血清、尿液中药物浓度测定，其优点是样品可直接进样分析，分析时间短，样液量少，准确度高。

　　● 空间排阻色谱法（SEC）又称为体系排阻色谱法，是利用多孔凝胶固定相，依据分子大小差异来进行分离的方法。根据凝胶性质可分为凝胶过滤色谱法（GFC）和凝胶渗透色谱法（GPC）。SEC适用于需很快提供未知样品分子大小、组成、近似分子量信息。GFC适用于分析水溶液中多肽、蛋白质、核苷酸、多糖等；GPC主要用于高聚物的分子测定。如聚乙烯、聚氯乙烯等精细化工原料。

　　● 间接光度液相色谱法间接光度液相色谱检测技术是一项正在发展中的色谱技术，在离子和离子对色谱中都有应用。该法是对于无紫外吸收的样品采用UVD来检测的方法。优点是扩大UVD的应用范围，可用于低响应或无响应的样品。多用于无机和有机阴离子的测定。。

　　● 化学衍生液相色谱法它是采用衍生试剂，借助化学反应给样品组分化合物分子接上某个特殊基团，使其衍生物能够改善分离效果和提高检测灵敏度的方法。可分为柱前和柱后衍生法。衍生试剂有多种，可与胺类、氨基酸、酚、醇等发生衍生化反应。

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