食品检测--食品中抗坏血酸的测定方法
样品前处理
1. 标准曲线的配置
配置浓度为1.0mg/ml L-抗坏血酸的标准储备液,配置成5μg/ml,50μg/ml, 100μg/ml, 250μg/ml ,500μg/ml标准曲线(标曲浓度请根据自己样品合理选择),用20g/L偏磷酸溶液定容至刻度,临用现配。
图一 本次选择了这一款标准品
2.样品溶液的制备
2.1 称取研细后样品0.5g于50ml容量瓶中,加入适量20g/L偏磷酸溶液,超声15min,并定容至刻度。此处直接用中速滤纸过滤了,没有离心,过滤速度不比离心慢多少。
2.2 用大肚吸管吸取20mL上述离心后的上清液于50mL离心管中,加入10mL40g/L的 L-半胱氨酸溶液,用100g/L磷酸三钠溶液调节pH 至7.0~7.2,以200次/min振荡5min。 再用磷酸调节pH至2.6(标准为2.5~2.8),用水将试液全部转移至50mL容量瓶中,并定容至刻度。 混匀后取此试液过0.45μm 水相滤膜后待测[由此试液可测定试样中包括脱氢型的 L(+)-抗坏血酸总量]。
若试样含有增稠剂,可准确吸取4mL经 L-半胱氨酸溶液还原的试液,再准确加入1mL甲醇,混匀后过0.45μm 滤膜后待测(本次样品不含增稠剂,故此忽略此步骤)。
色谱分析过程
色谱条件的选择
色谱柱:迪马钻石一代C18 250×4.6mm 5μm
检测器:紫外检测器,分析波长245nm。
流动相:A:6.8g磷酸二氢钾和0.91g十六烷基三甲基溴化铵,用水溶解并定容至1L用磷酸调pH 至2.5~2.8);B:100%甲醇。 按 A∶B=98∶2混合,过0.45μm 滤膜,超声脱气。
流速:0.9ml/min
柱温:25℃
图二 样品
图三 标准曲线
注意事项
这个实验过程中要戴好手套,注意安全,十六烷基三甲基溴化铵毒性是很不好的。
十六烷基三甲基溴化铵很轻且易产生气泡,配置流动相时会有一些飘在水面上与泡沫混在一起,很难发现,请多超声一些时间,务必保证全部溶解。
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