连续监测法具有测定准确等众多的优点,随着科学技术的发展,自动生化仪的使用,正在逐步取代“固定时间法”。实际工作中,测酶活性浓度常用酶偶联法。
最简单的酶偶联反应为以下模式:
A:底物
B:待测酶产物(不能直接测定)
C:指示酶产物(可以直接测定)
Ex:待测酶
Ei:指示酶
如果一些酶反应找不到合适的指示酶与其直接偶联,可以加入另一种酶,将两者连接起来,模式如下:
酶偶联反应与一般酶反应的一个重要区别是有一个明显的延滞期。从酶反应开始至稳态期间,指示酶反应较慢且不稳定,称为延滞期。
反应体系中不应有中间产物堆积,否则将导致误差。