小鼠肝组织DNA的提取
实验概要
掌握从动物组织中提取DNA的基本原理和方法，了解利用电泳技术分离、鉴定核酸的原理和方法。
实验原理
真核生物DNA主要以核蛋白形式存在于细胞核中，因此制备DNA必须先粉碎组织，裂解细胞膜和核膜，使核蛋白释放，在除去蛋白质、脂类、糖类和 RNA等物质，得到纯化的DNA。在本实验的提取DNA反应体系中，SDS（十二烷基磺酸钠）破坏细胞膜和核膜，并使蛋白质变性，将核蛋白中的DNA与蛋白质分开，EDTA及SDS抑制细胞中的DNA酶的活性。用酚、氯仿抽提的方法进一步除去蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀除净小分子化合物。提取出的 DNA制品进一步用含溴乙锭的琼脂糖凝胶电泳加以鉴定。
主要试剂
1. 生理盐水
2. 裂解缓冲液
3. 苯酚：氯仿混合液（1：1）
4. 无水乙醇
5. 70％乙醇
6. TE缓冲液
7. 溴酚蓝载样液
8. 溴乙锭溶液
9. TBE缓冲液
主要设备
1. 研钵
2. 研钵棒
3. 刻度离心管
4. 普通离心机
5. 小试管
6. Ep管
实验材料
小鼠
实验步骤
1. 处死小鼠，迅速取出小鼠肝脏，用生理盐水洗去附着血液，用滤纸吸干血水后称量0.5g肝实质组织放于研钵中。
2. 研钵中加入1ml裂解缓冲液、少量石英砂，研磨至匀浆，再加入2ml继续研磨至匀浆。
3. 取刻度离心管一支，加肝匀浆至1.0ml，再加入等体积苯酚：氯仿混合液抽提，每次抽提以中等大小的力来回振荡5min，然后离心 3000r/min，10min，水相吸入另一干净的小试管中，抽提重复3次。
4. 往乘有上水相的小试管中加入2.5倍体积的冷无水乙醇，轻轻混匀，此时可见有白色絮状沉淀，此即DNA粗制品。
5. 将试管中的上清液倒出，保留沉淀。用70％的乙醇洗涤沉淀2次，洗涤时动作要轻柔，同上法弃上清保留沉淀。
6. 加入0.25mlTE缓冲液溶解沉淀。
7. 取30ml沉淀溶解液放入Ep管中。
8. 向Ep管中加入溴酚蓝载样液5ml，混匀后即为鉴定所用样品。
9. 取琼脂糖0.3g，TBE缓冲液15ml加入锥形瓶中，加热锥形瓶使琼脂糖充分熔解后，加入10ml溴乙锭，混匀后将胶液倒入已放置样孔梳的胶板上。
10. 待胶板凝好后拔去样孔梳，取15ml样品液加入样孔槽中。
11. 将加好样品液的胶板放入乘有TBE缓冲液的电泳槽中，样孔槽位于阴极侧，盖好电泳槽盖后通电，调节电压100V电泳40-60min。
12. 泳毕，拿出胶板，在紫外光灯下观察结果。
注意事项
1. 吸水相时不要将界面上的变性蛋白质混入，抽提3次后一般有机相和水相界面上的变性蛋白质极少，肉眼基本看不见，若变性蛋白质仍较多，可增加抽提次数。实验中使用的吸取DNA水溶液的滴管管口需粗而短，并烧成钝口。
2. 最后一次弃上清时，尽可能去尽上清。
