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光学显微技术中使用的固定剂的配方介绍

2022.4.22

凝固型固定剂

1、酒精(ethyl,alcohol)

常用95%酒精及纯酒精。酒精穿透力强,固定时间常在1小时以内。高浓度酒精有使材料收缩的作用。70%的酒精可作保存液。配制低度酒精必须要用普通酒精即95%的酒精,绝不可用纯酒精。酒精为还原剂,不能与铬酸、锇酸、重铬酸钾等氧化剂配合。酒精可使核酸,蛋白质及肝醣等发生沉淀,但能溶解脂肪及拟脂。

2、铬酸(chromic acid)

铬酸是一种很好的保存剂,可以使蛋白质沉淀,组织硬化,但是容易使组织收缩,同时渗透 亦比较缓慢。一般与其它药剂混合使用,可以成为优良的固定剂。平常与醋酸合并应用,效果良好。特点:易潮解,为强氧化剂。缺点:渗透力弱,易使组织发生收缩。

3、苦味酸(picric acid)

苦味酸对于组织渗透缓慢,且能使组织强烈收缩。但可使蛋白质。核酸等沉淀,并防止过度硬化,对以后增进染色能力很大。一般很少单独使用,常与其他药剂混合使用。固定后需要用50%或70%酒精洗涤。特点:渗透力弱,易使组织发生收缩,易爆炸。注意事项:一般用50%或70%酒精洗涤。

4、醋酸(acetic acid)

醋酸为无色透明的液体,刺激性极强,冷则凝结成冰,故又叫冰醋酸。醋酸以与水和酒精配成各种比例的溶液,所用浓度为0.2~5%,也常与其他固定剂配合使用。醋酸穿透性很强,单独使用,有使原生质膨胀的作用,故常与酒精,甲醛等合用,醋酸为固定染色体的优良固定液,因此固定染色体的固定液中,几乎都含有醋酸。特点:渗透力强,可使组织产生膨胀作用。

非凝固型固定剂

1、 福尔马林(formalin)

浓度在2~10%的福尔马林,为很好的硬化剂,但是渗透力薄弱,而且对材料会引起强烈收缩。所以最好与其他药剂混合使用,效果会大大增加。注意的是,它亦是一种还原剂,故不宜与氧化剂铬酸、锇酸相混。特点:很好的硬化剂,强还原剂;渗透力弱。

2、重铬酸钾(potassium dichromate)

用作固定剂的浓度1~3%。其水溶液略具酸性,亦为一种强氧化剂。因此不能与酒精、甲醛液等事先储藏。同时为一种强烈的硬化剂,渗透力薄弱,所以很少单独使用。特点:强氧化剂,强硬化剂;渗透力弱。常与其它固定剂配合使用。

3、锇酸(osmic acid)

此物品十分昂贵,其溶液呈中性反应。是一种强烈的氧化剂,不能与酒精、甲醛液混用。锇酸是植物制片中一种最好的固定剂,对细胞里细微的构造能够良好的固定,并为脂肪性物质唯一固定剂。因此在线粒体及其他细胞器的研究中常常使用。经锇酸固定后,又能防止用酒精脱水时所产生的沉淀作用。但此种固定剂渗透十分薄弱,同时不易固定均匀,往往外边过度固定,而里边尚未固定完全。所以用作固定的材料应该愈小愈好。

特点:中性;渗透力极弱。电镜固定常用的固定剂;也是唯一能固定脂类分子的最好的化学固定剂。

4、戊二醛(glutaraldehyde)

特点:能与蛋白质分子的氨基和肽键连接形成交连;是最常用的非凝固型固定剂。可以部分保持酶和蛋白质的活性。固定能力比甲醛强。常用于电镜制片的固定;用缓冲液配制。

混合型固定液

混合原则:a、优缺点互补;b、膨胀与收缩相互平衡;c、强氧化剂与还原剂应分别配置。

1、酒精-福尔马林液

70% 酒精 100 ml

福尔马林 2 -10 ml

固定植物一般组织,尤其用在柱头中的萌发花粉管的固定。固定后的材料,立即用作观察。通常固定24小时,可长久保存。

特点:不易收缩,常用于固定花粉管。

2、甲醛-醋酸-酒精液(FAA)

50% 或70% 酒精 9 0 ml

冰醋酸 5 ml

福尔马林 5 ml

这个固定液在植物研究上,应用最多,为植物组织最常用的固定液。固定时间,不受限制,短为24小时,长可延至数月或数年。野外工作,非常便利。并且固定的材料,不妨碍染色。可用以固定植物的一般组织,但用作细胞学上的固定,不如其他一些专用的固定剂。经此液固定后的材料,可不必洗涤,直接用70%酒精脱水。

特点:过去称“标准固定液”或“万能固定液”;是组织形态中常用的固定液;同时可兼做保存液。

3、酒精-冰醋酸液

其中常用为卡诺液(Carnoy)

纯酒精 15 ml

冰醋酸 5 ml

可用作植物组织及细胞的固定,通常固定2-24小时,视材料的大小而定。固定以后即用95%的酒精脱水;如用作细胞学上的涂片,固定后可直接回到70%酒精,然后进行操作。

特点:具强渗透力,作用迅速;常用于染色体压片法的固定。

4、铬酸-醋酸-福尔马林液

又名纳瓦兴液(Nawashin)。1912年首创。常用为冷多夫(Randoph)改良液。

分为甲乙两部分,用前等量混合。

此液在植物制片上应用甚广,是细胞学及组织学上一种优良的固定液。此液原来的配方已很少应用,现所用的都是改良液,且种类很多,如材料较柔嫩,含水量较多,可用配方I、Ⅱ;材料较坚硬,含水量较少,可用Ⅳ、V 配方,其中配方Ⅱ对植物胚胎学制片特别适用。为了使用方便,常分别配成甲、乙两种基液,用时临时等量配合。固定时间为12-24小时,固定后用70%酒精洗涤数次。

特点:渗透慢,不能长期保存;主要用于显示分裂相。

5、 精-醋酸-氯仿固定液(Carnoy fixative)

酒精 30毫升

氯仿 5毫升

冰醋酸 1毫升

可用作植物组织及细胞的固定,固定根尖和花药只需30-60分钟。不可在此液中放置太久(以不超过一天为宜)。

6、 福尔马林-丙酸-酒精液(Johansen fluid)

福尔马林 5毫升

丙酸 5毫升

50%酒精 90毫升

此液可用作固定一般植物组织。固定根尖细胞,用作染色体观察。通常固定24小时,也可长期保存。

7、 铬酸-醋酸固定液

三氧化铬 1克

冰醋酸 1毫升

蒸馏水 100毫升

用于容易渗透的材料,如丝状藻类、菌类、蕨类的原叶体等。固定12-24小时。此液不作保存液。

8、 铬酸-醋酸-福尔马林液(Licent fluid)

1%铬酸 80毫升

醋酸 5毫升

福尔马林 15毫升

固定液中包含氧化剂与还原剂,因此,此液用时需要临时配制。通常固定12-24小时。

9、 氯化汞-锇酸固定液(Bensley fixative)

2.5%氯化汞水溶液 4份

2%锇酸 1份

此液一般可用以固定线粒体,固定12-24小时,水洗。

10、 铬酸钾-福尔马林固定液(Regaud fixative)

3%重铬酸钾 80毫升

福尔马林 20毫升

固定高等植物生长点,用以观察细胞的结构,效果良好。在植物细胞学中多采用为叶绿体的固定液。此液氧化性很强,应用时,最好临时配制。固定2-12小时。

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