生物素与细胞表面的膜蛋白是怎样结合的
通过生物素化标记分析细胞膜亚蛋白质组
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关闭细胞膜在许多基本生物学作用过程中扮演着重要角色,比如细胞-细胞相互作用、信号转导和物质运输.分析不同生理或病理状态细胞的膜蛋白的表达变化,有助于了解这些生物学过程以及发现新的诊断、治疗靶位.成功地进行膜蛋白分析最重要的是获得足够浓度与纯度的膜蛋白.这里报告一种分离高纯度膜蛋白的方法,主要包括三个步骤:(1)生物素化活细胞表面的膜蛋白,(2)链亲和素琼脂糖亲和吸附,(3)强烈的清洗条件去除非特异吸附的胞质蛋白.最后用化学方法洗脱生物素标记的膜蛋白进行双向电泳分离分析.用该方法制备了HeLa细胞的膜蛋白.免疫印迹结果表明,生物素标记的膜蛋白基本上都是低丰度蛋白.这样制备得到的膜蛋白双向电泳分离出2 400多个蛋白质点,而且大多数点的亮度相近,分布得相对分散没有聚集成群.这种图谱非常便于比较分析找到差异蛋白.多次重复制备膜蛋白、电泳表明该方法的重复性和稳定性很好.
刊 名： 中国生物化学与分子生物学报 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY 年，卷(期)： 2006 22(3) 分类号： Q78 关键字： 细胞膜 蛋白质组 双向电泳 生物素化 亲和纯化 机标分类号： R39 R81 机标关键字： 生物素化 标记分析 细胞膜 蛋白质 膜蛋白 生物素标记 双向电泳 化学方法 电泳分离 生物学过程 低丰度蛋白 作用过程 治疗靶位 信号转导 细胞表面 亲和吸附 物质运输 免疫印迹 链亲和素 分离分析 基金项目： 科技部科研项目
