水产原料中总糖的测定--苯酚硫酸法
实验概要
贝类等多糖，在沸水中加热后被水浸提而逐渐渗出，多糖在弄硫酸作用下生成醛酮类物质，当遇到显色剂苯酚时，发生显色反应，同时颜色与糖的浓度呈现很好的线性关系，在490纳米下测定吸光值，利用标准葡萄糖溶液可知贝类中多糖的含量。
实验原理
贝类等多糖，在沸水中加热后被水浸提而逐渐渗出，多糖在弄硫酸作用下生成醛酮类物质，当遇到显色剂苯酚时，发生显色反应，同时颜色与糖的浓度呈现很好的线性关系，在490纳米下测定吸光值，利用标准葡萄糖溶液可知贝类中多糖的含量。
主要试剂
浓硫酸（98%）；5%苯酚（棕色瓶4℃保存）；蒸馏水；标准葡糖糖溶液；
主要设备
电炉；烧杯；移液枪（1000μL）；试管（10个左右，具胶塞或显色管）；试管架；723紫外分光光度计；棕色容量瓶；100mL容量瓶；
实验材料
葡萄糖；苯酚（使用时80℃水浴溶解后吸取，使用后放置冰箱中4℃保存）；粗提糖液；浓硫酸；
实验步骤
标准曲线的绘制
α---标准溶液配制与显色：准确称取50mg于105℃烘干（4h左右）的葡萄糖，定容于500mL容量瓶中，分别取1.0mL、1.2mL……2mL的葡萄糖溶液加入显色管中，同时补水至2.0mL，摇匀后，用移液枪分别加入1mL
5%的苯酚溶液，迅速摇匀，后用10mL移液管（最好为鼓泡型）移取5mL浓硫酸（沿壁旋转加入），迅速摇匀，盖上塞子后放置室温待用；
β---显色：将葡萄糖溶液在490nm下在紫外分光光度计下测定OD值，以2mL水作为空白调零；
γ---原料测定
将冷冻肉制品冷却流水解冻后，冲洗干净后用滤纸吸干表面水分，后均匀选取用剪刀充分剪碎，不出现大块肉粒
用电子分析天平准确称量1g左右的样品，精确至0.0001；
将称好的样品放入研钵中充分研磨，至无大块肉粒，用水清洗干净后放入烧杯中，以50mL水计，煮沸30min；水可随时补充；
结束后将液体倒入离心管，同时剩余大块煮沸肉粒重复C步骤，至浸提完全；
离心机中5000转20min离心取上清液；
将上清液定容至100mL容量瓶放入4℃环境中保存；
按照葡萄糖测定的方法，根据原料情况分别取200μL至600μL的糖浸提液，测定吸光值
以标准方程计算含糖量
注意事项
苯酚应用80℃水浴溶解，苯酚有毒易挥发，做好防护措施；
原料处理时应尽可能均匀，同时不能有多块存在，浸提时应多次浸提；
添加浓硫酸时应沿壁旋转倒入，同时应迅速摇匀，以便显色均匀
显色后放置放至室温左右测定，时间最好在30min以上
