发酵罐降温需要保压力
一: 加水:到上试镜下方10厘米左右位置（★具体多少以煮完罐后水位到上试镜上方5厘米为宜）。
二: 通冷气（★目的是搅拌料，使料不容易沉淀，蒸汽遇冷水降低噪音），加料（★以黑木耳为例:培养料每百升1.6斤、红糖每百升1.4斤、葡萄糖或白砂糖0.7斤，消泡剂每百升20-25毫升），盖好盖子。
三: 罐内培养料灭菌:先把蒸汽锅炉一端加热开关打开，排气阀微开，待有蒸汽产生时，关闭排气阀，待压力达到3-4公斤压力时。链接检查蒸汽管道，蒸汽管道确定链接安全后，打开蒸汽机排气阀门，确定蒸汽顶到罐底部阀门时，再把罐体阀门打开，让蒸汽压入发酵罐内，罐体进蒸汽时总阀门要慢慢打开，不要一下子开到底。这时开始煮罐，(★检查:罐顶端的排气阀门是打开的→进水阀门是打开的→温度显示器是打开的)
一直等温度升到90-95度左右时，随着罐内培养料温度升高，噪音将减小，培养料因水温高翻滚也不再需要冷空气搅拌。这时关闭空气进入罐体中的所有阀门。
温度升到100度时，把罐体上面的排气阀门调节到微开的位置。温度升到125度～126度，压力达到0.14-0.15时，开始计时灭菌60分钟。(★在升温的过程中要保持温度和压力的平衡，可以通过调节排气阀，或者调节下方进蒸汽总阀大小进行达到平衡）。
四: 滤芯灭菌:液体罐灭菌计时开始后，3000瓦蒸汽机排冷气，蒸汽阀门产生蒸汽时，关闭排气阀门，压力调节到2--2.5公斤压力，压力不要超过2.5公斤，压力达到后开始给滤芯灭菌，先把蒸汽机与罐体上滤芯的硅胶管接好，把蒸汽锅炉一端的出气阀门打开，再把罐体上滤芯进蒸汽阀门打开，随后把两个滤芯下面排水阀门微开，空气进入罐体内的三通未接硅胶管的另一端小阀门也微开，(★检查:不要将下方空气进入滤芯的小阀门打开，不要把进入罐体内部的总阀门打开)
开始灭菌。直到罐体培养料计时结束，滤芯也同时灭菌结束。把蒸汽关闭，
(★滤芯灭菌计时结束后阀门关闭与空气阀门开启顺序:关闭滤芯进蒸汽小阀门→关闭蒸汽机排气阀门→打开气压调节阀→调节压力0.08-0.1→打开滤芯空气进入小阀门→关闭3000瓦蒸汽机电源)
用空气把滤芯中蒸汽残余水分进行吹干，待使用。
(★滤芯灭菌一次后，如空气不停，或者一直保持有压力在滤芯内部时，可以连续使用，连续使用5次不用灭菌)
五: 罐体灭菌计时结束，(★关闭阀门顺序:关闭罐体下方进蒸汽总阀门→关闭蒸汽机排气阀→关闭蒸汽机电源)
六: 降温:在灭菌计时未结束前10分钟，把夹层进水阀门和出水阀门管道链接。等液体罐培养料灭菌计时结束，这时把冷水阀门一端的阀门打开，开始用冷水向罐体夹层加水降温。降温的同时，压力也会下降，(★夹层进水阀门接法:夹层下方阀门为进冷水阀门→夹层上方阀门为排水阀门→★夹层限制水压不得超过2.5公斤★)待用
七: 通纯净空气搅拌降温:发酵罐通过冷水夹层降温，压力降到0.06--0.08时，关闭上下两道滤芯下方的排水阀，关闭进入罐体内部未链接硅胶管另一端排气阀门，调节气压调节阀，大于发酵罐压力至少0.02，打开滤芯与罐体链接空气总阀门，给液体罐通冷气进行搅拌。夹层冷水循环，罐内空气搅拌，发酵罐的温度降到所做菌种所需要的温度时，把进水和出水阀门全部关闭，夹层保持满水状态培养(★夹层中有保温加热棒，缺水环境下回烧坏加热棒)待接种。
八: 接种:接种前先把75度酒精喷壶、要接种的摇瓶、火焰圈、打火机、湿毛巾、开盖白钢杆准备好。用75度酒精把接种口周围灭菌，把摇瓶上面的锡纸或者牛皮纸打开，把火焰圈在95度酒精中浸泡后放到接种口周围，把墙壁上的气压调节阀，气压降低到排气阀可以完全卸掉罐压位置，点燃火焰圈，用白刚棍把接种口打开，拧到最后一圈，打开接种盖的同时，把排气阀关闭，把三角瓶摇瓶种拿过来，再把摇瓶口在火焰上高温灭菌处理，打开摇瓶上面的棉塞或硅胶塞，再次进行火焰高温灭菌处理，液体摇瓶种灭菌后倒入摇瓶液体菌，注意搅拌子不要倒入罐内，接种后迅速拿起接种盖在封口火焰上进行高温灭菌处理，迅速盖上，用白刚棍拧好，用湿毛巾把火扑灭，接种完成。再把通气量调到0.025～0.05左右培养。稳定压力30分钟不离开，直到压力稳定即可，(★接种时动作越轻，速度越快越好)
压力稳定后用记号笔或者标签在罐体上标好接种时间、日期和品种名称，直到培养结束，(★培养结束后放掉夹层冷水，清洗罐内待使用)
400-1000升双层发酵罐配件表
配电箱1台(380/220可选)
0.01μm滤芯2个
接种抢2个
一寸蛇纹防爆蒸汽管(一罐1根)
一寸防爆蒸汽管接头(一罐1个)
一寸白钢耐高温球阀1个
黄铜接种阀1个
黄铜单项阀1个
4分黄铜球阀2个
黄铜三通2个
白钢安全阀1个
医用压力表1个
黄铜排气阀1个
滤芯黄铜排水阀2个
硅胶管(一罐3米)
进水黄铜阀门1个
排水黄铜阀门1个
2000瓦保温加热棒1根
滤芯快装卡扣2个
开盖白钢杆1根
