左金丸生物碱含量测定

2020.6.24

　　左金丸—总生物碱的测定—分光光度法

　　1 范围

　　本方法采用分光光度法测定左金丸中总生物碱（以盐酸小檗碱计算）的含量。

　　本方法适用于中成药左金丸。

　　2 原理

　　供试品置索氏提取器用适量盐酸-甲醇（1:100）回流提取后，定容。取一定量置中性氧化铝柱净化，收集乙醇洗脱液，定容。取一定量加 0.05mol/L 硫酸溶液稀释定容。置紫外可见分光光度计, 于波长 345nm 处测定吸收度，以盐酸小檗碱（C20H17NO4•HCl）的吸收系数（E^1%_1cm）728 计算总生物碱含量。

　　3 试剂（除特殊注明外均为分析纯试剂）

　　3.1 盐酸

　　3.2 甲醇

　　3.3 硫酸(0.05mol/L)

　　3.3 氧化铝柱 (内径 0.9cm，中性氧化铝 5g，湿法装柱，用 30mL 乙醇预洗)

　　4 仪器设备

　　4.1 紫外-可见分光光度计

　　4.2 索氏提取器

　　5 试样制备

　　5.1 供试品溶液的制备

　　取供试品粉末过三号筛（50 目），精密称取 1g，置索式提取器中，加盐酸-甲醇（1:100）适量，加热回流至提取液无色，提取液移至 50mL 量瓶中，用盐酸-甲醇（1:100）稀释至刻度，摇匀。精密量取 5mL 照柱色谱法置氧化铝柱上，用乙醇 25mL 洗脱，收集洗脱液，置 50mL量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀。

　　注 1：“柱色谱法”系指色谱柱为内径均匀，下端缩口的硬质玻璃管，下端用棉花或玻璃纤维塞住，管内装入吸附剂。吸附剂的颗粒应尽可能保持大小均匀，以保证良好的分离效果。

湿法装柱：将吸附剂与洗脱剂混合，搅拌除去空气泡，徐徐倾入色谱柱中，然后加入洗脱剂将附着管壁的吸附剂洗下，使色谱柱面平整。

　　供试品的加入：将供试品溶液沿管壁缓缓加入，注意勿使吸附剂翻起。

　　6 操作步骤

　　6.1 供试品的测定

　　精密量取供试品溶液 2mL，置 50mL 量瓶中，加 0.05mol/L 硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在 345nm 波长处测定吸收度。

注：分光光度法应以配制供试品的同批溶剂为对照，采用 1cm 的石英吸收池。以吸收度最大的波长作为测定波长，一般供试品的吸收度读数，以在０.３－０.７之间的误差较小。仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度偏低。狭缝宽度的选择，应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准。由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸收度后应减去空白读数，再计算含量。

　　7 结果计算

　　定量测定按盐酸小檗碱（C20H17NO4•HCl）的吸收系数（E^1%_1cm）为 728 计算：根据样品溶液的稀释倍数及测得的吸收度，求出 1%浓度的供试品溶液的吸收度，除以 728，乘以体积及稀释倍数，除以供试品称量，求出供试品中盐酸小檗碱的含量。

　　C = 125000(AX/ER) /W

　　C — 为供试品的含量（mg/g）；

　　AX — 为供试品溶液的吸收度；

　　ER — 为（E^1%_1cm）345nm 的吸收系数为 728；

　　W －为供试品的称量(g)。

　　注 1：E 为吸收系数，采用的表示方法是（E^1%_1cm），其物理意义为当溶液浓度为 1%（g/mL）,液层厚度为 1cm 的吸收度数值。

　　注 2：每 g 含总生物碱以盐酸小檗碱（C20H17NO4•HCl）计，不得少于 60mg。

　　8 精密度：

　　一般供试品溶液的吸收度读数，以在 0.3-0.7 之间的误差较小。取对照品溶液，连续测定 5次，其吸收度的相对标准偏差应不大于 2%。

　　9 参考文献