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凝胶电泳的显色

2022.4.29

观察凝胶中DNA的最简便、最常用的方法就是利用荧光染料溴化乙锭进行染色。溴化乙锭是一种具有扁平分子的核酸染料,在高离子强度下,大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。在DNA溴化乙锭复合物中,DNA吸收254nm处的紫外辐射并传递给染料,而结合的染料分子本身吸收302nm和399nm的光辐射,因此吸收的能量可在可见光谱红橙区的590nm处重新发射出来。

因此对核酸分子染色之后,将电泳标本放置在紫外光下观察,便可以十分敏感而方便地检测出凝胶介质中DNA的谱带部位,即使每条DNA带中仅含有0.05g的微量DNA,也可以被清晰地显现出来。在适当的染色条件下,荧光的强度是同DNA片段的大小或数量成正比的。

在包含有几种DNA片段的电泳谱带中,每一条带的荧光强度是随着从最大的DNA片段到最小的DNA片段方向逐渐降低的。

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