含有目的基因真核表达 pEGFP-C1载体的构建实验_克隆法
| 实验方法原理 | 在设计引物时,一对引物两端分别加了两个酶切位点,这两个酶切位点与pEGFP-C1 载体多克隆位点中的酶切位点相吻合,且位置和方向都合适。这样, 目的基因片段和pEGFP-C1 载体经双酶切后,由于酶切位点一致,在T4 DNA 连接酶的作用下就可以连接。 |
|---|---|
| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1. 双酶切纯化的目的DNA 片段和pEGFP-C1 载体。 反应体系：
反应条件： 37 ℃ 2 hrs 至过夜 2． 回收后电泳检测浓度， 然后进行连接反应。 反应体系：
反应条件： 室温2 hrs， 或者4 ℃过夜。 展开 |
| 注意事项 | 10 ×Ligation Buffer 用之前要震荡混匀。 |
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