人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒
简介
肾素受体(RR)是肾素和肾素前体的共同受体.当肾素与其受体结合后, 肾素作用于全身循环及局部组织中的血管紧张素,使其变成血管紧张素1,另外肾素受体受刺激后会激活细胞内的信号通道.
公认地对RR的研究对抑制过度活跃的肾素-血管紧缩素-醛固酮系统提供重要的研究方略.
(P)RR是一种分子量为39 kDa的单跨膜受体蛋白.据报道其中的29 kDa的可溶性片段是由于RR的裂解而产生的.因此定量的检测血液或尿液中的可溶性(P)RR可以作为检测发病新的辅助工具,作为解释其病理机制的新途径.
此ELSIA检测试剂盒可以定量检测人血液和尿液中的可溶性肾素(前体)受体。日本IBL中国独家代理，人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。
此试剂盒基于酶免法的夹心原理，利用两种高特异性抗体，TMB作为显色剂，显色的强度与人肾素受体的量成正比
125~8000pg/ml
日本IBL中国独家代理，人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。 日本IBL中国独家代理，人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。
仅用于研究，不能用于诊断
此试剂盒可用于血清，EDTA-血浆，尿液和细胞培养上清液中人肾素受体的定量检测
预包被板，抗人肾素受体兔IgG，亲和纯化 96孔
标记抗体浓缩液，
30X，HRP标记抗人肾素受体（93A1B）小鼠IgGFab’ 0.4mlx1
标准品，重组人肾素受体 0.5mlx2
EIA缓冲液，1%BSA，含0.05%吐温20的PBS 30mlx1
标记抗体稀释液，1%BSA，含0.05%吐温20的PBS 12mlx1
着色剂，TMB底物液 15mlx1
终止液，1N硫酸 12mlx1
洗涤缓冲浓缩液,40X，含0.05%吐温20的磷酸缓冲液 50mlx1
酶标仪
微移液管和枪头
烧杯
去离子水
冰箱（4℃）
坐标纸
吸水纸
用于稀释标准品的试管
洗瓶
一次性试验管
洗涤缓冲液制备：先将洗涤浓缩液平衡至室温，充分混匀，然后吸取50ml浓缩液与1950ml的去离子水混匀，即得。配制的洗涤液应保存于冰箱内，并于2周内用完
标记抗体的制备：用标记抗体稀释液将标记抗体稀释30倍，即得。
如：如果只测一条板，8孔，则需要标记抗体800ul（30ul的标记抗体+870ul的标记抗体稀释液，混匀，使用时每孔加100ul）
此步骤在实验前完成
剩余的标记抗体浓缩应装于密封瓶内，保存在4℃
标准品的制备：吸取0.5ml的去离子水至标准品瓶内，充分混匀，得到1600pg/ml的人肾素受体标准品
标准品的稀释：准备8个试管用于标准品的稀释，每管加入230ul的EIA缓冲液
每管的浓度如下
1号管 8000pg/ml
2号管 4000 pg/ml
3号管 2000 pg/ml
4号管 1000 pg/ml
5号管 500 pg/ml
6号管 250 pg/ml
7号管 125 pg/ml
8号管 0ng/ml（试验样品空白）
吸取230ul的标准品于1号管混匀，然后从1号管吸取230ul加入2号管，依次连续稀释，标准品范围为8000~125 pg/ml
样品稀释：样品用EIA缓冲液稀释。如果样品浓度未知，建议稀释几个不同比例的样品进行检测，来确定样品最佳稀释比例
使用前，所有样品应平衡至室温，大约30min，然后充分混匀，确保试剂质量无变化，标准曲线和样品检测同时进行
试剂 检测样品 标准品 检测样品对照孔 试剂对照孔 检测样品100ul 稀释标准品（1-7管）100ul EIA缓冲液（第8管）100ul EIA缓冲液100ul 盖板，4℃下孵育过夜 洗板4次 酶标抗体 100ul 100ul 100ul - 盖板，4℃下温育60min 洗板5次 显色剂 100ul 100ul 100ul 100ul 室温避光温育30min 终止液 100ul 100ul 100ul 100ul 加终止液后,30min内于酶标仪450nm处读取OD值
确定试剂空白孔并加入100 μL EIA缓冲液
各加加100ul试验样品空白，样品和稀释的标准品至相应的孔内
盖板，4℃下孵育过夜
洗板，重复4次以上，吸水纸上拍干
每孔加入100ul的标记抗体液，除试剂空白孔外
盖板，4℃下孵育60min
洗板5次，同步骤四
吸取试验所需的TMB底物液于一次性试管内，每孔加入100ul的TMB底物液。剩余的TMB底物液不能再放回至原装瓶内
黑暗处，室温下孵育30min，溶液变蓝
每孔加入100ul的终止液，溶液变蓝
擦去微孔板底部的污点或水滴，终止液加入后30min内，在酶标仪450nm处读数
试验样品采集后应立即检测或是冻存，冻存的样品避免反复冻融，检测前应在低温下先将其完全溶解混匀
试验样品用EIA缓冲液稀释，
试验样品和标准品应做双份检测
试验样品应在中性PH范围，有机溶剂的污染可能会影响检测
只能用试剂盒提供的洗涤液洗板，否则会导致试验失败
吸水纸上拍干微孔板，不能擦拭
TMB底物液应贮存于黑暗处，因其对光敏感，且避免接触金属
加入终止液后30min内必须酶标仪读数
绘制曲线前，所有的数据都应减去试验样品空白值，包括标准品和未知的样品。以标准品的OD值和浓度在对数-对数坐标纸上绘制标准曲线，从标准曲线上可直接读取未知样品的浓度
附：采用全自动酶标仪检测，只需检测前设置好酶标仪的相关参数，如坐标参数（线性，半对数）和计算方式参数（三次回归、四参数或双对数曲线方程），即可直接得到结果
日本IBL中国独家代理，人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。 日本IBL中国独家代理，人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。
本译文仅供参考，详情请以原文为准。
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