E 玫瑰花环形成试验(E Rosette Test)
一、基本原理
正常人外周血中T 细胞在体外能直接和绵羊红细胞(SRBC)结合形成玫瑰花样细胞团。这是因为人的T 细胞膜上具有能和SRBC
膜上的糖蛋白相结合的受体，称为E 受体。已证实E 受体是人T 细胞所特有的表面标志，因此本试验可作为人外周血T
细胞的鉴定和计数，同时作为人细胞免疫功能状态的一个检测指标，也是分离T 细胞的常用方法之一。本实验为示教内容，学生只看结果。
二、实验材料
1. 肝素抗凝人外周血1ml。
2. 淋巴细胞分层液(见附录)2ml。
3. 0.5%SRBC悬液：将脱纤维的绵羊静脉血用Hank's液洗3 次，再用Hank's液配制为含压积SRBC为0.5%的悬液(约含SRBC 8×107／m1)。
4. 经SRBC 吸收的灭活的新生小牛血清(NBS)，取无菌NBS 置56℃水浴经30分钟灭活，取已灭活的NBS 2 体积，加入经洗涤后的压积SRBC l 体积，混匀后置37℃温箱30 分钟，离心沉淀，吸取上层血清即成。
5. Hank's 液：pH7.4(见附录)。
6. 血球计数板、尖吸管、载玻片、瑞氏(Wright's)染液等。
三、实验方法
1. 取肝素抗凝血1ml 加1ml Hank's 液，混匀后用尖吸管将其加在2m1 分层液上。
2. 离心2000rpm，30 分钟，用尖吸管吸取血浆与分层液界面处富含淋巴细胞的悬液置于另一洁净试管中。
3. 用Hank's 液以1000rpm，离心10 分冲洗细胞两次，末次弃上清后再加入Hank's液1ml，混匀，用微量加样器吸取0.02ml 加于0.38ml 白细胞计数液中，在血球计数板上于低倍镜下计数，并根据下式算出每毫升细胞数。
然后用Hank's液配制成107／ml细胞悬液。
4. 取107／ml细胞悬液0.1ml加0.1ml经SRBC吸收的灭活NBS，再加0.2ml0.5%SRBC悬液，混匀，放37℃温箱5 分钟，低速离心500rpm，5 分钟，然后放4℃冰箱2 小时或过夜。
四、实验结果
计数200 个淋巴细胞，凡结合3 个SRBC 以上者为E 玫瑰花阳性细胞，求
出百分率即为T 细胞百分比。正常值为68±9.9%。
五、注意事项
SRBC 自绵羊体内取出后限在2 周内使用。
