关于心房肌细胞的培养、缺氧预处理的问题说明
心房肌细胞又称心肌纤维，有横纹，受植物性神经支配，属于有横纹的不随意肌，具有兴奋收缩的能力。呈短圆柱形，有分支，其细胞核位于细胞中央，一般只有一个。那么，心肌细胞该如何进行培养和缺氧预处理呢？下面，小编就这些问题进行一一解答。
一、心肌细胞培养
选取出生1~2dSPF级大鼠，采用75%乙醇皮肤消毒后，开胸剪下心脏，剔除心包、心房和大血管等，去除残血，将心肌剪成约1mm3的碎块，采用0.125%不含乙二胺四乙酸的胰酶复合0.1%Ⅰ型胶原酶混合多次消化，200目筛网过滤获取心房肌细胞，差速贴壁70min并结合5-BrdU化学抑制法提纯心肌细胞，培养细胞隔天换液。原代心肌细胞采用含10%胎牛血清的高糖培养基培养。
二、心肌细胞缺氧/复氧损伤模型的制备
心房肌细胞培养72h后，替换不含血清的低糖培养基，并置于厌氧培养袋中（内含厌氧产气袋和氧含量指示条），充入纯氮气2min，迅速密封厌氧袋，构建缺氧环境（O2%<1%）。缺氧3h后，更换为含10%胎牛血清的高糖培养基，置于37℃、95%空气-5%CO2无菌培养箱中继续培养6h。
三、心肌细胞缺氧预处理
根据预实验的结果，将心房肌细胞培养72h后，替换不含血清的低糖培养基，并置于厌氧培养袋中（内含厌氧产气袋和氧含量指示条），充入纯氮气2min，迅速密封厌氧袋，构建缺氧环境（O2%<1%）。缺氧30min后，更换为含10%胎牛血清的高糖培养基，置于37℃、95%空气-5%CO2无菌培养箱中继续培养30min。
推荐
