微生物样品的取样方法及取样要求（二）
四、几种较常见的表面取样技术
①拭子法
进行定量检测时，必须先用灭菌取样框（塑料或不锈钢等）确定被测试的区域。
棉花-羊毛拭子：用干燥的棉花-羊毛缠在长4cm，直径1cm~1.5cm的木棒或不锈钢丝上做成棉花-羊毛拭子。然后将拭子放在试管中，盖上盖子后灭菌。取样时先将拭子在稀释液中浸湿，然后在待测样品的表面缓慢旋转拭子平行用力涂抹两次。涂抹的过程中应保证拭子在取样框内。取样后拭子重新放回装有10ml取样溶液的试管中。
藻酸盐棉拭子：由海藻酸钙羊毛制成。将海造酸盐羊毛缠在直径为1.5mm的木棒上做成长1cm~1.5cm、直径7mm的拭子头，灭菌后放入试管中。取样步骤同①。取样后放入装有10ml的1+4Ringer氏溶液（含1%偏磷酸六纳）的试管中。
② 淋洗法
用10倍于样品的灭菌稀释液（质量比）对样品进行淋洗，得到10-1的样品原液，这种取样方法可适用于全禽、干果、蔬菜等食品。报告结果时，应注明该结果仅代表样品表面的细菌总数。
③胶带法
这种取样方法要用到不干胶带或不干胶标签。不干胶标签的优点是能把取样的详细情况写在标签的背面，取样后贴在粘贴架上。不干胶胶带取样后同样需转接到一个无菌粘贴架上。这种方法可用于检测食品表面和仪器、设备表面的微生物。胶带和标签制成后，可用易挥发溶液进行短时间的灭菌。必须确保灭菌后的胶带无菌或残留的微生物失去活性。
胶带或标签的一端要向内弯回大约1cm左右以方便使用。取样时，把胶带从粘贴架上取下压在待测物质表面，迅速取样后，重新粘回到模板上。送到实验室后，将胶带（或标签）从粘贴架上取下，压在所需培养基表面。
④琼脂肠法
琼脂肠有无菌圆塑料袋（或塑料筒）和加入其中的无菌琼脂培养基制成。可在实验室制作，一些国家也有成品出售。使用时，在琼脂的末端无菌切开，将暴露的琼脂面压在样品表面，用无菌解剖刀切下一薄片，放在培养皿上培养。
⑤影印盘
影印盘是一种无菌的塑料盘，也可称为“触盘”，可以从许多生产厂商处买到。制作时按要求在容器中央填满足够的琼脂培养基，并形成凸状面，需要时，将琼脂表面压在待测物表面。取样后再放入适当的温度培养。
⑥触片法
用一个无菌玻片触压食品表面，带回实验室。固定染色（如革兰氏法）后在显微镜下检测，也可以将取样的玻片压在倒有培养基的平板上，将细菌转接到琼脂表面，（用无菌镊子）移去玻片后，培养平板。这种方法不能用于菌体计数，但能快速判断优势菌落的类型，这对生肉、禽肉和软奶酪等食品更为适用。
⑦表层切片法
用灭菌解剖刀或镊子切取一薄层表层样品。这种方法最适用于家禽皮肤的取样。将样品放入装有适当稀释液和适当稀释度的容器中，均质后得到初始浓度为10-1的样品原液。
（6）厌氧微生物检验用样品的采取
取样检测厌氧微生物时，很重要的一点是食品样品中不能含有游离氧。例如在肉的深层取少量样品后，要避免使之暴露在空气当中。如只能抽取小样品，或需使用棉拭子取样时，就要用一种合适的转接培养基（如Stuart运送培养基）来降低氧的浓度。例如，如使用藻酸盐羊毛拭子取样后，就不能再放入原来的试管，而应放在盛有Stuart运送培养基的瓶中。棉拭子使用前要先用强化的梭菌培养基浸湿。
（7）水样的采取
采集水样应注意无菌操作，以防止杂菌混入。取水样时，最好选用带有防尘磨口瓶塞的广口瓶。对于用氯气处理过的水，取样前在每500ml的水样中加入2ml的1.5%的硫代硫酸钠溶液。
在取自来水时，水龙头嘴的里外都应擦干净。再用酒精灯灼烧水龙头灭菌，然后把水龙头完全打开，放水5min~10min后再将水龙头关小，采集水样。这样的取样方法能确保供水系统的细菌学分析的质量，但是如果检测的目的是用于追踪微生物的污染源，建议还应在龙头灭菌之前去水样或在龙头的里边和外边用棉拭子涂抹取样，以检测龙头自身污染的可能性。
从水库、池塘、井、河流等处取水样时，用无菌的器械或工具拿取瓶子和打开瓶塞。应先将无菌取样器浸入水下1cm~15cm处（井水则在水下50cm深处采样），然后掀起瓶塞采集水样。流动水区应分别采取靠岸边及水流中心的水。如果不具备适当的取样仪器或临时取样工具，只能用手操作，但取样时应特别小心，防止用手接触水样或取样瓶内部。
（8）空气样品的采取
空气的取样方法，有直接沉降法和过滤法。
在检验空气中细菌含量的各种沉降法中，平皿法是最早的方法之一，到目前为止，这种方法在判断空气中浮游微生物分次自沉现象方面仍具有一定的意义。平皿法就是将琼脂平板或血液琼脂平板放在空气中暴露一定时间，然后37℃培养48h，计算所生长的菌落数。
五、二级与三级取样方案
二级取样方案：只设定合格判定标准m值，超过m值的为不合格品。通过检查在检样中是否有超过m值的，来判定该批产品是否合格。例如：生食海产品鱼的副溶血弧菌标准为n=5、c=0、m=102 ，其中n=5即取样5个，c=0即意味着在该批检样中，未见到有菌落数超过m值的检样，此批货物为合格品。
三级取样方案：设有微生物标准值m及M值，如同二级法，菌落数超过m值的检样，即算为该检样不合格。所有检样均小于m值，即为合格；在m值到M值范围内的检验数，在c值范围内，即为附加条件合格，否则为不合格；有检样超过M值者，则为不合格。例如：冷冻生虾的细菌总数标准n=5、c=3、m=101、M=102，其意义是从一批产品中，取样5个检样，检样结果允许≤3个检样的菌落数在m和M值之间。如果有3个以上检样的菌落数是在m和M值之间或一个检样菌落数超过M值者，则判定该批产品为不合格品。
