人类细胞中巴氏小体的观察实验
M.L.Barr等人首先发现雌猫的神经细胞间期核中有一个深染的小体,而雄猫却没有。由于这个小体和性别及X染色体数目有关,所以称为X染色质,也叫做巴氏小体(Barrbody)。之后在其他雌性哺乳动物细胞和人类女性的许多细胞中发现有同样的小体。
现在一般认为X染色质是两个X染色体之一在间期时发生异固缩而形成的,且通常为失活状态。失活的染色体是随机的,失活状态使得雌性个体两个X染色体所携带的两份基因的遗传效应与雄性个体一个X染色体所具有的一份基因的遗传效应基本相当,达到一种剂量补偿效应,是维持雌雄两性生物基因表达一致所特有的遗传效应。来源：《遗传学实验教程》
| 实验方法原理 | 在性染色体发生畸变时,XXX核型的女性体细胞中可观察到两个巴氏小体(图12-1),即除一条X染色体具有正常活性外,其余的X染色体均失活,而在具47,XXY核型的男性体细胞中,也可观察到巴氏小体。对巴氏小体的研究有助于揭示X连锁基因的调控机理、性染色体的进化过程以及解释性染色体畸变患者的症状表现等。
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| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1.取材及制片。口腔黏膜细胞:先让受检者用水漱口数次,以尽可能去除口腔内杂物,然后用医用压舌板刮取受检者口腔颊部黏膜,将刮取物在载玻片上涂片,晾干。 毛根鞘细胞:取受检者带毛根鞘的毛发一根,放在一干净的载玻片上。在根部加一滴50%醋酸溶液,静置5min,待毛发软化后,用干净针头将根部组织刮下,去毛干,并用针头将刮下的组织均匀分开,晾干。 2.将制片置甲醇-冰醋酸(3∶1)固定液中20min。 3.将载玻片依次放入95%、70%、50%乙醇及蒸馏水中,每次2～3min。 4.置5mol/L盐酸中水解约5s。在此过程中RNA被分解,富含RNA的小体也会被硫堇染色。这一步骤十分关键,酸解不够不能除去RNA,酸解过度又会破坏DNA。 5.蒸馏水漂洗2～3次,每次10～15s。 6.硫堇染色10～20min,蒸馏水漂洗,晾干即可镜检。如染色太深则可在95%乙醇中分化30s左右,如太浅可复染。人毛根鞘细胞制片可直接用硫堇水溶液染色后,移入75%乙醇中约30s,轻轻摆动,取出晾干即可。 选择细胞核较大、染色清晰、轮廓清楚的细胞100个,统计X染色质的出现频率。X染色质位于细胞核膜的内侧,轮廓清晰呈平凸形、三角形或卵圆形,颜色为深蓝色,直径1～1.5μm。阳性涂片至少15%的细胞含X染色质,一般不超过30%～35%。来自男性的涂片偶尔也可观察到X染色质,但出现频率低于2%。 展开 |
