结缔组织观察实验（一）
实验材料 大白鼠小白鼠
试剂、试剂盒 台盼蓝生理盐水溶液甘油瑞特染液
仪器、耗材 解剖器一套注射器及针头滴管载玻片盖玻片显微镜
实验步骤
一、材料和用具
大白鼠或小白鼠。皮下结缔组织经活体染色及弹性纤维染色和H－E染色的平铺片、气管切片（H－E染色）、小肠切片（H－E染色）、小白鼠肠系膜平铺片（苏丹Ⅲ染色）、跟腱切片（H－E染色）、淋巴结切片(H－E染色)、淋巴结银染色切片、骨磨片。疏松结缔组织的电镜图片。
1％的台盼蓝（trypan blue）生理盐水溶液、甘油、瑞特（Wright）染液。
解剖器一套、注射器及针头、滴管、载玻片、盖玻片、显微镜。
二、操作
疏松结缔组织
（一）疏松结缔组织活体染色标本的制作与观察
取一大白鼠（或小白鼠），从皮下注射1％台盼蓝生理盐水溶液少许，30 ~ 60 min后，将鼠杀死。剪开皮肤，在注射处附近剪取一小块皮下结缔组织，置一载玻片上。然后，左、右手各持一根解剖针，将组织挑开平铺于载玻片上。待标本稍干后，加1~2滴甘油，盖上盖玻片即可观察。
1. 低倍镜观察 区分胶原纤维及弹性纤维。胶原纤维不着色，为透明的白色。弹性纤维较胶原纤维细，呈浅黄色。
2. 高倍镜观察 根据细胞的形状、胞核的形状与染色，以及胞质内的颗粒等区别成纤维细胞及巨噬细胞。成纤维细胞呈多突起扁平状。巨噬细胞形状不规则，胞质内含有蓝色颗粒。
（二）台盼蓝活体染色及Weigert弹性纤维染色法染色，并经H－E对比染色的猫或兔皮下结缔组织平铺片的观察。
1．低倍镜观察 选择标本较薄而又均匀处观察，可见交叉成网的纤维及散在分布于纤维之间的结缔组织细胞。
2．高倍镜观察 先区分纤维，然后区分细胞。用此法可显示胶原纤维及弹性纤维。在纤维之间散布有结缔组织细胞，在此主要要求分辨成纤维细胞及巨噬细胞。
（1）胶原纤维 被染成粉红色的粗细不等的细带状。它们相互交叉排列，数目较多。胶原纤维分辨不清。有时胶原纤维呈波浪状。
（2）弹性纤维 被染成深紫褐色，其断端常呈卷曲状。比胶原纤维细，单条，有分支，连结成网。
（3）成纤维细胞 数目最多，胞质染色淡，轮廓不甚明显，仔细观察呈多突扁平状。胞核大，多为椭圆形，染成蓝紫色。
(4)巨噬细胞 细胞形状不一，呈圆形、椭圆形或不规则形。由于经过活体染色，所以可见其胞质内含有吞噬的台盼蓝颗粒。胞质染色较深，细胞轮廓较成纤维细胞清楚。胞核较小，为圆形、椭圆形或肾形，胞核染色也较深，为深蓝紫色。
另外，在平铺片中还能看到一些有粒白细胞和淋巴细胞。
（三）肥大细胞的观察
用小白鼠（或大白鼠）为材料，取少许皮下结缔组织制成平铺片。充分晾于后滴加瑞特染液（瑞特染料0.1 g溶于60 ml甲醇中），使染液将材料完全淹没。染1 min后，逐滴加等量蒸馏水，与染液混合均匀。静置5 ~ 1 0min后，倾去染液，用自来水洗净，待干后，不经封固即可镜检。
先用低倍镜在平铺片的血管边缘找到成堆分布的肥大细胞后，换用高倍镜观察。肥大细胞胞体较大，圆形或卵圆形。胞核圆形，不着色。胞质内充满粗大的红紫或蓝紫色颗粒。有时还可见到肥大细胞的脱颗粒现象。
（四）用兔气管切片（H－E染色）观察浆细胞和疏松结缔组织在石蜡切片上的形态结构，并与疏松结缔组织平铺片作比较。
在切片上的疏松结缔组织不像平铺片那样，纤维多被切断，染色也有所不同。今后学习器官组织学时，所观察的切片经常会遇到疏松结缔组织在切片上的形态，故应予注意。
1. 低倍镜观察 在上皮的深层找到染色略浅的结构，即为疏松结缔组织。
2. 高倍镜观察 多数为胶原纤维，染成粉红色、较粗。与不规则分布的弹性纤维相混杂，但在切片上弹性纤维不易区别。在纤维之间有染成蓝紫色长椭圆形的胞核，多为成纤维细胞的胞核。在这个区域寻找一种卵圆形的细胞，该细胞的胞核位于细胞一侧，染色质呈辐射状排列，胞质近核处有一浅染区域，这种细胞即是浆细胞。
（五）示范观察疏松结缔组织的电镜下结构
1. 扫描电镜下结构用结缔组织扫描电镜图片观察，区分胶原纤维、成纤维细胞和巨噬细胞。
2．透射电镜下结构用结缔组织透射电镜图片观察。
（1）胶原纤维 可见胶原纤维纵切面上有明暗交替的周期性横纹，横纹周期约64 nm。
（2）成纤维细胞 细胞为多角形。胞质突起较长，胞质内粗面内质网、高尔基复合体发达，胞核较大。
（3）巨噬细胞 细胞表面有微绒毛，胞质内有大量溶酶体，近细胞边缘有较多小泡。胞核的核质颗粒细，多聚于核膜内面。
致密结缔组织
用蛙跟腱纵切片（H－E染色）观察。
（一）低倍镜观察
可见染成红色的胶原纤维束呈平行而紧密的排列。
