制药行业液相分析的普遍适用梯度方法
用液相色谱法发展(方法)并不容易什么样的流动相，什么色谱柱，如何设置梯度，什么温度，什么波长等，是刚刚进入队伍的学生非常头疼的问题。
所以，它的存在对于大多数是共同的液相方法（通用HPLC方法）它的小分子有机化合物的？
理想是满的，但这一次现实不是骨瘦如柴。
虽然我们找不到100%通用的液相方法，但我们找到了一种“一般”方法，可以作为制药工业中大多数小分子分析的起始条件。在此基础上，根据实际高峰情况做了一些小的调整。这个方法基本上可以在一两个小时内完成。
该方法发表在2016年LCGC杂志上，作者授权我们分享文章的内容并进行总结。
色谱条件
色谱柱：
Waters or Agilent, Cortecs C18 + Poroshell HPH-C18 (2.7 [mu] m, 50 × 3.0mm thick)
A通道：0.05%甲酸
B通道：乙腈
梯度条件：
5-60％B in 2 min, 60-95％ B in 0.5 min
流量：1.0毫升/分钟
色谱柱温度：40 ℃
Detection: UV and MSESI + at 220 or 254 nm.
那么，如何在这些色谱条件选择出来的，我们来看一个酒吧。
你为什么选这个专栏？
选择表面多孔颗粒柱（spp）的原因是它能提供比其他类似色谱柱更高的柱效应，并为碱性化合物提供更小的尾。
同时，粒径为2.7μm，内径为3mm，可以更好地考虑高效液相色谱和UPLC方法的需要，流速和进样体积更接近于常用的4.6mm内径色谱柱。在相同的流动相条件下，(a)柱：WatersCorecsC18，2.7(m，50x3.0mm；(b)柱：WatersBEHC18柱，1.7μm，50x3.0mm，与用不同色谱柱获得的色谱图相比，峰拖尾更严重，用于分析(a)混合物。
50mm长列选择能够获得的速度和峰值容量之间的平衡的灵活性。梯度时间（梯度的时间）为一分钟10分钟增加峰值容量（峰值容量）容易地从100至300，如下所示：
梯度时间分别为（a）1 min；（b）3 min；（c）10 min时的峰值容量。
选用0.05的六甲氰酸作为水相，主要考虑了流动相较易制备，同时在质谱中使用时可以有较高的电离效率。
乙腈比甲醇粘度低，压力低，被选用为有机相。
※注意的是，在检测低波长（小于230nm的）的，优选在乙腈中的0.03％甲酸加入到吸收AB相位差二相流之间的平衡，以更好地确保顺利基线。
两段梯度（乙腈：5%～60%，60%～95%）比大段梯度（5%～95%）更适合分离小分子药物中的疏水性较低的化合物。
根据选定的列选择1ml/min的流量。
一般而言，35度40度的柱温度属于常规设置。
