关于外植体的所处状态和存活条件介绍
外植体取材的不同状态具体表现为外植体生理状态、取材部位、取材时期、外植体的大小及受伤程度、外植体预处理等。幼龄材料比成龄材料褐变轻, 这可以用幼龄材料的酚类化合物含量少, 而成龄材料多来解释。平吉成在研究小金海棠、八楞海棠和山定子刚生成的实生苗上切取茎尖进行组培的试验中, 发现接种后褐变很轻。高度分化的叶片作为外植体,接种后则很容易褐变, 而在幼嫩器官或组织(如胚)中, 褐变则较轻。植物体内酚类化合物含量、PPO(多酚氧化酶)活性与外植体所处的生长季节有关, 而PPO活性和酶类含量有正相关性, 春秋季较弱, 随着生长季节的到来, 酶活性逐渐增强, 所以早春和秋季取材较为适宜。Wang等也报道“富士”苹果和“金华”桃5 ～ 8 月取材褐变严重,而在9 月到翌年2月取材褐变有所减轻, 核桃的夏季材料比其他季节材料更易褐变。外植体大小对褐化的影响,表现为小的材料更易发生褐化, 相对较大的材料褐化的程度则较轻。由于膜结构或细胞中物质区域化分布的破坏是酚类物质酶促褐变的重要因素,切口越大导致酚类物质的被氧化面也越大, 褐化程度会更严重。Bonga等在巨桉和卡德兰的组织培养中得出, 外植体越小, 切面与体积的比率越大, 伤害及褐化的程度越大。除了机械伤害外, 接种时各种化学消毒剂对外植体的伤害也会引起褐变。组培中常用酒精和升汞消毒。Ziv等用0.3%升汞代替Ca(ClO)2 进行消毒,可降低鹤望兰的褐变程度。一般来说, 延长外植体消毒时间会使消毒效果增加, 但对外植体伤害也大, 从而加剧褐变。因而消毒时间应掌握在一定范围内, 才能保证较高的外植体存活率。
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