混合剂技术纯化人外周血单核细胞
混合剂技术纯化人外周血单核细胞
试剂和器材：
1. 抗凝血剂：100mmol/L 乙二胺四乙酸或38g/L柠檬酸钠；
2. Hepes缓冲生理盐水（HBS）：8.5g/L NaCl、10mmol/L Hepes-NaOH，pH7.4；
3. OptiPrepTM；
4. 台式低速离心机；
5. 巴斯德吸管（短型和长型）；
实验方法：
1. 用乙二胺四乙酸（2mmol/L终浓度）或柠檬酸钠（38g/L终浓度）作为抗凝剂来收集静脉血；
2. 在合适的带帽离心管（可容纳5—10ml样品的15ml管）中，全血与OptiPrepTM（分别为10倍体积和1.25倍体积）轻柔但彻底地混合（反复颠倒几下）；
3. 在顶端加入约0.5ml Hepes缓冲生理盐水，并且在20℃，1500g下离心30min；
4. 用缓慢减速程序或不制动的方法使转子减速；
5. 从凹液面向下吸取外周血单核细胞直至距细胞沉淀约1cm处；
6. 用2倍体积的Hepes缓冲生理盐水稀释收集到的外周血单核细胞，再在250g—500g离心5—10min以沉淀细胞；
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