全自动磁珠提取纯化技术——Thermo Scientific kingfisher技术 一
技术原理：
KingFisher系列产品是适于分离DNA/RNA、蛋白和细胞的全自动提取纯化系统，专为解决客户现在和未来的所有纯化问题而设计。创新的产品基于ZL的KingFisher技术(ZL号US
6447729, US
6448092)，通过特制的磁棒吸附、转移和释放磁珠，从而实现磁珠/样品的转移，避免了液体处理过程，提高了自动化程度。KingFisher技术的工作原理如下图所示，样品、溶液和磁珠置于微孔板或管中，磁棒表面套有专门的磁套用于保护磁棒避免与样品/溶液/磁珠直接接触。
kingfisher技术原理图
磁珠的分类：
KingFisher技术所采用的磁珠粒径在0.5-10μm之间，其内核是铁氧体(Ferrite-based)，表面覆盖高分子惰性材料，如苯乙烯、琼脂糖等。与经典的层析介质相比，磁珠的粒径比常规的介质粒径(40μm)小，因而具有更大的比表面积，而某些具有超顺磁性(Superparamagnetic)的磁珠具有更好的悬浮性能和分散性。
根据不同的表面处理与标记，可将磁珠分成各种不同的应用类型：
TiO2磷酸化多肽富集磁珠
磁珠表面覆盖有一层TiO2材料，可以选择性的与磷酸化的氨基酸残基：丝氨酸(Ser)、酪氨酸(Tyr)、苏氨酸(Thr)结合，而与酸性的氨基酸残基的非特异性结合最小。与传统的IMAC技术相比，其灵敏度提高了1000倍，富集后磷酸化蛋白的质谱检出限达100
fmol。
谷胱甘肽(GSH)磁珠
该磁珠表面包被有琼脂糖，并偶联有谷胱甘肽，可以特异性的与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)结合，因而可用于纯化带有GST标签的重组蛋白。TALON™磁珠。TALON磁珠的原理是基于采用Co离子的固定化金属离子亲和技术(IMAC)，可用于纯化带有组氨酸标签(6xHis)的重组蛋白。
Protein A和Protein G磁珠
带有Protein A或Protein G基团的磁珠，可广泛应用于IgG的纯化、免疫沉淀(IP)和免疫共沉淀(Co-IP)等。
硅质膜磁珠
这是一类最早出现的产品，广泛应用于DNA、RNA的纯化。其原理类似于使用硅质膜的离心柱，磁珠在高盐条件下与核酸结合，而在低盐环境下被洗脱，可用于全血、组织、细菌、病毒、植物等的核酸纯化。
反相RPC磁珠
类似于反向层析的原理，可用于多肽的分离纯化。Jimenez等使用KingFisher96和Dynabead® RPC 18磁珠仅需20min就可以平行处理96个样品，用于与疾病相关的血清中肽段表达谱的研究。
ChargeSwitch®磁珠
ChargeSwitch磁珠的原理类似于离子交换技术，磁珠在pH
< 6.5的缓冲液中带正电，可与带负电的核酸结合；在pH>
8.5的缓冲液中磁珠带负电，使得之前吸附的核酸从磁珠上释放。ChargeSwitch磁珠可在KingFisher平台上完美使用。
技术应用：
基因组学
KingFisher磁珠提取纯化平台，非常适合于基因组学的研究。无论提取样本的来源是微生物、动物、植物或是病毒，KingFisher都可以快速的纯化出足够数量的DNA或RNA。高质量的结果可以满足下游应用(如荧光定量PCR)的需要。
畜牧兽医、CDC的应用
使用专门的KingFisher试剂盒，可高效、高灵敏度地提取禽流感病毒(Avian
influenza virus)、新城疫病毒(Newcastledisease virus)、牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral
diarrheavirus)、立克次体(Coxiella burnetii)等。KingFisher结合Ambion的MagMAX-96
AI/ND病毒RNA提取试剂盒，应用于禽流感病毒的检测，是获得美国农业部(USDA)认可的高通量方法。提取得到的RNA可以通过ABI公司的Infleuenza
A/H5 Kit检测是否含有禽流感病毒，并进一步确认是否是备受关注的H5亚型。
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