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碱裂解法提取质粒dna的原理

2022.5.21

其基本原理为:

当菌体在NaOH 和SDS 溶液中裂解时,蛋白质与DNA 发生变性,当加入中和液后, 质粒 DNA 分子能够迅速复性,呈溶解状态,离心时留在上清中;蛋白质与染色体DNA 不变性而呈絮状,离心时可沉淀下来。

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相关介绍:

细菌质粒是一类双链、闭环的DNA,大小范围从1kb 至200kb 以上不等。各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份,通常情况下可持续稳定地处于染色体外的游离状态,但在一定条件下也会可逆地整合到寄主染色体上,随着染色体的复制而复制,并通过细胞分裂传递到后代。

质粒已成为目前最常用的基因克隆的载体分子,重要的条件是可获得大量纯化的质粒DNA 分子。目前已有许多方法可用于质粒DNA 的提取,本实验采用碱裂解法提取质粒DNA。

纯化质粒DNA 的方法通常是利用了质粒DNA 相对较小及共价闭环两个性质。例如,氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心、离子交换层析、凝胶过滤层析、聚乙二醇分级沉淀等方法,但这些方法相对昂贵或费时。

对于小量制备的质粒DNA, 经过苯酚、氯仿抽提,RNA 酶消化和乙醇沉淀等简单步骤去除残余蛋白质和RNA,所得纯化的质粒DNA 已可满足细菌转化、DNA 片段的分离和酶切、常规亚克隆及探针标记等要求,故在分子生物学实验室中常用。


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