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基因导入的生物学法

2021.6.09

  主要通过构建病毒载体来完成。

  1 逆转录病毒(retrovirus,Rv)

  构建简单,装载外源基因容量最大达8kb,整合入宿主细胞基因组而无病毒蛋白表达。但仅能感染分裂期细胞,体外制备滴度较低,且其随机整合有引起“插入性突变”的可能。

  2 腺病毒(adenovirus,Adv)

  为近年肝细胞肝癌基因治疗中报告最多的一种病毒载体。体外制备滴度较大 ,装载外源基因容量最大达35kb,不整合入宿主细胞基因组因而避免插入突变的危险,能感染分裂细胞和非分裂细胞。但易引起宿主免疫反应而使转染效率下降,且大剂量静脉给予可导致严重的肝脏炎症反应,因此通过全身给药受到限制。Nagao等发现瘤内注射重组Adv后,目的基因可有效表达,但表达时间短暂,重复注射后表达效率降低且诱发体液和细胞免疫反应。

  3 单纯疱疹病毒

  单纯疱疹病毒(herps simplex virus,HSV)对非分裂细胞有天然的亲合力,装载外源基因容量达30kb,体外制备滴度接近腺病毒。但构建时难以除去与裂解细胞有关的基因而对细胞毒性大。

  4 腺相关病毒

  腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)在人类不引起任何病理性后果,它能感染非分裂S相细胞,还能将基因转人非周期(noncyling)肿瘤细胞。AAV是一种缺陷前病毒,对人类无致病性。能用于运载外源性重组基因组,已应用于肝和肝癌细胞的治疗基因转移。

  5 其他病毒

  痘苗病毒(vaccini virus)可以独立在细胞之中复制和转录,并能以较强的方式表达多个肿瘤抗原。

  杆状病毒(bacul virus)能够感染肝细胞和肝肿瘤细胞,并能增强肝细胞肿瘤坏死因子a(TNFa)、IL-1a、IL-lβ的表达。

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