化学发光酶免疫分析的概念和应用介绍
化学发光酶免疫分析(Chemiluminescent enzymeimmunoassay，cLEIA)属酶免疫分析，只是酶反应的底物是发光剂，操作步骤与酶免分析完全相同：以酶标记生物活性物质进行免疫反应，免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物，在信号试剂作用下发光，用发光信号测定仪进行发光测定。
目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP )和碱性磷酸酶(ALP)，它们有各自的发光底物。
HRP最常用发光底物是鲁米诺及其衍生物。在CLEIA中，使用过氧化物酶标记抗体，进行免疫反应后，利用鲁米诺作为发光底物，在过氧化物酶和起动发光试剂(NaOH和H2o2)作用下鲁米诺发光，酶免疫反应物中酶的浓度决定了化学发光的强度。此传统的化学发光体系(HRP-H2O2-LUMINOL)为几秒内瞬时闪光，存在发光强度低、不易测量等缺点。后来，在发光系统中加入增强发光剂，以增强发光信号，并在较长的时间内保持稳定，便于重复测量，从而提高分析灵敏度和准确性。
碱性磷酸酶(ALP)已广泛用于酶联免疫分析和核酸杂交分析。碱性磷酸酶和1，2．二氧环乙烷构成的发光体系是目前最重要、最灵敏的一类化学发光体系。这类体系中具有代表性的是ALP-AMPPD发光体系。在溶液中AMPPD的磷酸酯键很稳定，非酶催化的水解非常慢，在pHl2的0.05 mol／L碳酸钠缓冲溶液中，分解半衰期可达74年，几乎没有试剂本身的发光背景。AMPPD为磷酸酯酶的直接发光底物，可用来检测碱性磷酸酶或抗体、核酸探针及其他配基的结合物。ALP-AMPPD发光体系具有非常高的灵敏度，对标记物ALP的检测限达10-21 mol，是最灵敏的免疫测定方法之一。对AMPPD加以改进，获得具有更好反应动力学和更高灵敏度的新一代产物：CSPD、CDP-Star。这些体系已广泛用于各种基因、病原体DNA的鉴定。
